细胞组分的化学反应

细胞的组织化学方法,是研究细胞成分常用的方法之一。它是利用化学试剂与细胞内的某些物质进行化学反应,从而在细胞局部形成有色沉淀物,再通过显微镜对组织内的生物化学成分进行定性、定位、定量研究。 一、Brachet反应一显示细胞内的DNA和RNA (一)原理 细胞经甲基绿一呱咯宁混合液处理后,其中的DNA和RNA出现不同的呈色反应,一般认为这是由于带有负电荷的核酸对碱性染料呱咯宁和甲基绿具有亲和力,且这两种染料的作用有选择性,甲基绿染高聚分子的DNA呈蓝绿色,呱咯宁染低聚分子的RNA呈红色。由此对细胞中的DNA和RNA进行定位、定性、和定量分析。 (二)方法 l.接种Hela细胞于盖片上并培养24~48小时,使长成单层。 ......阅读全文

细胞组分的化学反应

细胞的组织化学方法,是研究细胞成分常用的方法之一。它是利用化学试剂与细胞内的某些物质进行化学反应,从而在细胞局部形成有色沉淀物,再通过显微镜对组织内的生物化学成分进行定性、定位、定量研究。    一、Brachet反应一显示细胞内的DNA和RNA    (一)原理    细胞经甲基绿一呱咯宁混合液处

细胞组分的化学反应实验

实验方法原理 细胞经甲基绿一呱咯宁混合液处理后,其中的DNA和RNA出现不同的呈色反应,一般认为这是由于带有负电荷的核酸对碱性染料呱咯宁和甲基绿具有亲和力,且这两种染料的作用有选择性,甲基绿染高聚分子的DNA呈蓝绿色,呱咯宁染低聚分子的RNA呈红色。由此对细胞中的DNA和RNA进行定位、定性、和定量

细胞组分的化学反应实验

Brachet反应细胞内碱性蛋白和酸性蛋白的显示细胞内过氧化物酶的显示过碘酸雪夫反应(PAS)实验方法原理细胞经甲基绿一呱咯宁混合液处理后,其中的DNA和RNA出现不同的呈色反应,一般认为这是由于带有负电荷的核酸对碱性染料呱咯宁和甲基绿具有亲和力,且这两种染料的作用有选择性,甲基绿染高聚分子的DNA

细胞组分的化学反应实验——Brachet反应

实验方法原理细胞经甲基绿一呱咯宁混合液处理后,其中的DNA和RNA出现不同的呈色反应,一般认为这是由于带有负电荷的核酸对碱性染料呱咯宁和甲基绿具有亲和力,且这两种染料的作用有选择性,甲基绿染高聚分子的DNA呈蓝绿色,呱咯宁染低聚分子的RNA呈红色。由此对细胞中的DNA和RNA进行定位、定性、和定量分

细胞组分的化学反应实验_过碘酸雪夫反应(PAS)

实验方法原理组织、细胞的多糖、粘多糖及粘蛋白等都可用PAS法来显示,其化学基础是利用过碘酸的氧化作用,打开碳链形成醛,生成的醛基与Schiff试剂中的无色品红反应形成紫红色化合物。实验材料小白鼠试剂、试剂盒PBS缓冲液丙酮二甲苯乙醇三氯醋酸固绿硫酸铜联苯胺混合液番红过碘酸酒精液Schiff氏酒精液亚

细胞组分的化学反应_细胞内碱性蛋白和酸性蛋白的显示

实验方法原理由于不同的蛋白质分子所带的碱性和酸性基团的数目不同,在pH值不同的溶液中,蛋白质分子所带的净电荷多少不同。如在生理条件下,整个蛋白质所带负电荷多,则为酸性蛋白质;带正电荷多,则为碱性蛋白质。据此,可将标本经三氯醋酸处理提出核酸后,用不同pH值的固绿染液分别染色,细胞内的酸性蛋白和碱性蛋白

细胞组分的化学反应实验_细胞内过氧化物酶的显示

实验方法原理过氧化物酶能把许多胺类氧化为有色化合物,用联苯胺处理标本,细胞内的过氧化物酶能把联苯胺氧化为蓝色的联苯胺蓝,进而变为棕色产物,因而可以根据颜色反应来判定过氧化物酶的有无或多少。实验材料小白鼠试剂、试剂盒PBS缓冲液丙酮二甲苯乙醇三氯醋酸固绿硫酸铜联苯胺混合液番红过碘酸酒精液Schiff氏

细胞组分的分析方法

实验概要本文介绍了细胞组分分析方法的原理及操作流程等。实验原理核酸分子杂交技术是目前分子生生物学、细胞生物学和生物化学研究中应用最广泛的技术之一,是定性、定量和定位检测两条来源不同的聚核苷酸链上碱基顺序同源性的一种手段。DNA分子是高度有序的双键分子。一条链的碱基与另一条链的碱基以氢键配对相连.形成

细胞组分的分析方法2

4.rDNA片段的制备 (1)对所得重组质粒DNA进行SacⅠ酶切,反应体系如下:SacⅠ 4μl(约20单位),质粒DNA 50μl(20μg),10×缓冲液(0.5mol/L Tris-HCl,pH7.5,50mmol/L MgCl2)10μl,灭菌重蒸水36μl。 (2)将反应后

细胞组分的分析方法1

一.基本原理核酸分子杂交技术是目前分子生生物学、细胞生物学和生物化学研究中应用最广泛的技术之一,是定性、定量和定位检测两条来源不同的聚核苷酸链上碱基顺序同源性的一种手段。DNA分子是高度有序的双键分子。一条链的碱基与另一条链的碱基以氢键配对相连.形成腺嘌呤与胸腺嘧啶(A.T),鸟嘌呤与胞嘧啶(G.C

酶的细胞化学反应过程

酶的细胞化学反应包括两个反应: 第一反应是酶作用于底物的反应, 称酶反应,形成的产物称为初级反应产物;第二反应是捕捉剂与初级反应产物的作用,称捕捉反应,产生最终反应产物:┌────酶的细胞化学反应─────┐│ 酶+条件 初级  捕捉剂   │底物──→反应产物──→ 最终反应产物(酶反应)  (捕

细胞[组分]分级分离的定义

中文名称细胞[组分]分级分离英文名称cell fractionation定  义应用不同的离心技术,将细胞匀浆中的各种细胞器或不同组成成分分离纯化的过程。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二级学科)

细胞组分和细胞器——细胞膜

Isoelectric Focussing of Membrane Protein by Slab Gel Method (Hancock Lab)  Isolation of Outer Membrane Protein from P.Aeruginosa with Octyl-Poe (Hanc

细胞组分和细胞器——细胞骨架

Fixation and Immunofluorescence of the Cytoskeleton (Mitchison Lab)  Recycling Tubulin (Mitchison Lab)  Labeling Tubulin and Quantifying Labeling Stoi

常见细胞裂解液及其组分

  在许多细胞内蛋白表达、纯化及蛋白-蛋白互作等免疫实验(如WB、IP、Co-IP、ChIP)中,细胞裂解是关键一步。 图片源自于网络 基本介绍   根据不同细胞类型、蛋白定位及下游应用,需要不同的细胞裂解液进行细

细胞组分和细胞器——细胞器分离

Labeling Microtubules (Molecular Dynamics Inc.  )Microtubules are involved in many aspects of cell motion including propulsion, mitosis, growth, and o

DNA的细胞化学反应——Feulgen反应

实验概要 1、了解Feulgen反应的基本原理。 2、熟悉传统细胞化学实验的基本实验技能和操作方法。实验原理 Feulgen反应是1924年由Feulgen和Rossenbeck开创的。这一反应的原理是:DNA经酸(1mol/LHCL)水解,其上的嘌呤碱和脱氧核糖之间的键打开,使脱氧核糖的一端形成游

细胞组分和细胞器——染色体

Chromosomal DNA Prep : cultured cells/tissue samples (Mike A Dyer)This protocol was developed for cultured cells but should be appropriate for dissoci

酶的细胞化学反应的反应过程

酶细胞化学反应实际上就是孵育反应的过程,孵育液的成分主要有酶的底物、捕捉剂,保证孵育液pH的缓冲液以及有关的添加剂等。孵育的温度和时间可根据不同的酶和组织通过实验而确定。电镜酶细胞化学的样品在孵育反应后需经锇酸后固定、梯度乙醇脱水、环氧树脂包埋和超薄切片,至电镜下观察。

细胞、细胞器及组分的分离与观察2

细胞器标记酶的测定是评价细胞器内膜组分和分离纯度的主要依据,如线粒体内膜上分布有细胞色素氧化酶,该酶使詹纳斯绿B染料保持在氧化状态呈现蓝绿色,从而使线粒体显色,而胞质中的染料被还原成无色。詹纳斯绿B是一种活体染料,能对动植物的细胞或组织在活体状态下进行无毒害的染色。由于染料(碱性染料)的胶粒表面带有

细胞、细胞器及组分的分离与观察1

叶绿体的分离与荧光观察一、实验目的了解叶绿体分离的一般原理和方法,并熟悉应用荧光显微镜方法观察叶绿体荧光现象。二、实验原理叶绿体是植物细胞中较大的一种细胞器,能发生特有的能量转换。利用低速离心机可以分离叶绿体,其分离在等渗溶液(0.35mol/L氯化钠或0.4mol/L蔗糖溶液)中进行,目的是为了防

什么是细胞[组分]分级分离?

中文名称细胞[组分]分级分离英文名称cell fractionation定  义应用不同的离心技术,将细胞匀浆中的各种细胞器或不同组成成分分离纯化的过程。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二级学科)

酶的细胞化学反应的样品制备过程

酶细胞化学的一个重要问题是既要保存好细胞内酶的活性,又要保存好细胞的结构,因此选择适当的固定剂种类、浓度、固定的方式和时间是细胞化学技术的一个关键问题。光镜样品固定多选用中性福尔马林或多聚甲醛,4℃、24小时,常规的石蜡包埋切片可以满足相当一部分酶的细胞化学要求;电镜样品固定通常用0.5~2%戊二醛

细胞组分的分析方法——线粒体的分离与观察

一.实验目的用差速离心法分离动、植物细胞线粒体。二.实验原理  线粒体(mitochondria)是真核细胞特有的,司能量转换的重要细胞器。细胞中的能源物质——脂肪、糖、部分氨基酸在此进行最终的氧化,并通过藕联磷酸化生成ATP,供给细胞生理活动之需。对线粒体结构与功能的研究通常是在离体的线粒体上进行

用分离的亚细胞组分进行激酶分析

实验材料 细胞器样品 试剂、试剂盒 激酶分析缓冲液ATP 仪器、耗材 SDS-PAGE 凝胶 实验步骤 1. 准备反应混合物:反应体积通常是 50~100 ml。 5X 激酶分析缓冲液                              10

只需100个细胞的表观基因组分析

  近年来,表观遗传学已经成为了干细胞分化、炎症、癌症等多个领域的研究热点,但它在临床上的潜力还未得到充分挖掘。表观基因组分析可以帮助医生根据患者的自身状态调整治疗方案,最终实现个性化医疗。问题在于,表观基因组分析需要的细胞量很大。举例来说,检测全基因组的蛋白-DNA互作和染色质修饰大约需要一千万细

细胞组分的分析方法——定量细胞化学分析技术2

5.固定方法(1)福尔马林法:  在单细胞悬液中加入等体积含8%甲醛的盐水G,4℃下固定12至18小时。该法常用于Acriflavine-Feulgen染色。(2)乙醇法:  细胞被重新悬浮于5ml冷盐水G中,慢慢加入-20℃95%的乙醇15ml,其最终浓度为70%,冰浴30分钟。此法常用于EB及P

细胞组分的分析方法——定量细胞化学分析技术1

一.流式细胞光度术-单细胞悬液染色标本的多信息分析法1.概述  流式细胞光度计(flow cytometry)可定量地测定某一细胞中的DNA、RNA或某一特异蛋白的含量,以及细胞群体中上述成分含量不同的细胞的数量,特别是它还可将某一特异染色的细胞从数以万计的细胞群体中分离出来,以及将DNA含量不同的

细胞组分的分析方法——核酸序列的原位杂交

一.基本原理  核酸分子杂交技术是目前分子生生物学、细胞生物学和生物化学研究中应用最广泛的技术之一,是定性、定量和定位检测两条来源不同的聚核苷酸链上碱基顺序同源性的一种手段。DNA分子是高度有序的双键分子。一条链的碱基与另一条链的碱基以氢键配对相连.形成腺嘌呤与胸腺嘧啶(A.T),鸟嘌呤与胞嘧啶(G

单细胞代谢组分析有了新技术

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