TFA问题
TFA在缓冲液中是不是只起到调节pH的作用呢？TFA的浓度越高基线的漂移越厉害，那是不是说它的浓度在缓冲液pH允许的情况下越低越好呢？（1）TFA起到类似离子对的作用，一般浓度在0.05-0.1%，过高的浓度，会使溶液偏酸，长时间使用可能影响柱子寿命。（2）同时TFA可以抑制硅胶表面硅醇基，改善碱性化合物的峰型。有时0.1%TFA分离不好的话。可以考虑加大浓度到0.2%。但要注意用完后及时冲洗色谱柱。（3）走梯度时，因为走成基线漂移，但对制备的影响不大。......阅读全文
反相高效液相色谱
方案1 蛋白质 RP-HPLC 的标准色谱条件 方案2 填充 RP-HPLC 毛细管微柱 方案3 不易分离的大分子量多肽的纯化实验 方案4 用 RP-HPLC 对固相合成的多肽进行纯化实验 方案5 用 RP-HPLC 技术对多肽和蛋白质混合
蛋白质氨基端及羧基端序列分析实验
方案1 两相柱测序仪的样品上样实验 方案2 将蛋白质从凝胶电转移至 PVDF 膜实验 方案3 检测 PVDF 膜上的蛋白质实验 方案4 浓缩聚丙烯酰胺凝胶上的蛋白质点实验 方案5 磷酸化多肽的固相微量测序实验 方案6 羧基端序列分
液相色谱流动相中缓冲液有那些作用
有很多，比如酸类的：醋酸，磷酸，TFA等缓冲液；碱类的：三乙胺，二乙胺。还有盐类的：磷酸二氢钾，酸酸氢二钾等。作用主要就是调节PH，防止样品解离，便于分离，峰型更好。
氨基去保护后，怎么除去三氟乙酸
谢谢bigcity(站内联系TA)NH的TFA盐，据我的经验溶解性在CH2Cl2 中号是不错的，可以先将样品溶于CH2Cl2 中加容2当量NaHCO3，搅拌过滤即可以。不过不知道你的化合物是不是分子量太大了， 脱完盐后溶不容于CH2Cl2，你可以少量试试。tlmouyg(站内联系TA)我最还是就是试
多肽分析过程中常见问题解读
小分子越来越难做，大分子发展很强势，似乎成为了近年来药物研发市场的重要表现之一，“多肽”类药物正是其中的一大热门。目前多肽药物的质量监管日趋渐严，在这种趋势下，寻找能满足更高分离度，灵敏度的分析方法就显得尤为重要。很多小伙伴在在开发多肽类样品分析方法中总是遇到各种的问题，无比烦恼。这里小编就总结了一
杂化颗粒C18色谱柱和乙酸流动相进行肽的高载量研究－三
基于此，CSH130 C18和BEH130 C18生成最佳峰形的流动相条件应该有所不同。为此，还使用10倍酸性的酸(1%HOAc)调节的流动相进行了分离。尽管中等浓度对于开发纯化工艺可能具有一定参考价值，但此处未对其进行评估。如图3所示，改变流动相组分后，CSH柱的峰形大大改善，但BEH柱的峰形变得
高效反相液相色谱
反相色谱（reversed phasc chromatography, RPC）是基于溶质、极性流动相和非极性固定相表面间的疏水效应建立的一种色谱模式，任何一种有机分子的结构中都有非极性的疏水部分，这部分越大，一般保留值越高，在高效液相色谱中这是应用面最广的一种分离模式，在生物大分子的反相液
蛋白质内序列分析用肽段的分离与纯化实验
试剂、试剂盒 考马斯亮蓝 G 乙酸 甲醇 Achromobacter 胰蛋白酶 I 三氟乙酸 乙腈 2-丙醇
蛋白质内序列分析用肽段的分离与纯化实验
试剂、试剂盒 考马斯亮蓝 G乙酸甲醇Achromobacter 胰蛋白酶 I 三氟乙酸乙腈2-丙醇仪器、耗材 SpeedVac 型旋转浓缩器Tween-20UltrafreeTM MC 滤器C18 反相 HPLC 柱实验步骤 材料与设备考马斯亮蓝 G(0.05% 的乙酸-20% 甲醇溶液）乙酸 (5
反式脂肪酸的检测方法
目前，测定食品中TFA的方法主要包括：气相色谱法（GC）、红外光谱法（IR）、气相色谱质谱法等。其中，气相色谱法可以有效分离各种TFA并准确测定其含量，灵敏度，目前应用较多。 3.1 红外光谱法（IR） 红外吸收光谱法是一种使用较早的检测反式脂肪酸含量的方法 ,特别是它能准确测定独立双键
多肽合成步骤
1、树脂的选择及氨基酸的固定 用于多肽合成的高分子的载体主要有3类:交联聚苯乙烯;聚酰胺;聚乙烯乙二醇脂类树脂。氨基酸的固定主要是通过保护的氨基酸的羧基同树脂的反应基团之间形成共价键来实现。 2、氨基、羧基、侧链的保护及脱除 要成功合成具有特定的氨基酸顺序的多肽，需要对暂不参与形成酰胺
液相色谱仪检测护肤品中四环素类抗生素的含量
环素类抗生素是一类广谱抑菌剂，高浓度时具杀菌作用，对革兰氏阳性菌、阴性菌、立克次体、滤过性病毒、螺旋体属乃至原虫类都有很好的抑制作用；对结核菌、变形菌等则无效。长期应用可发生耐药金黄色葡萄球菌、革兰阴性杆菌和真菌等引起的消化道、呼吸道和尿路感染，严重者可致败血症。四环素类的应用可使人体内正常菌群减少
芋螺毒素的线性肽合成的相关介绍
芋螺毒素的化学合成是获得芋螺毒素的重要方法，也是进一步研究芋螺毒素活性与结构的基础。关于芋螺毒素线性肽的合成研究已较深入，合成过程中最主要的问题是二硫键如何正确连接。针对不同的芋螺毒素合成，一般是在原有研究基础上，进一步摸索适宜的保护基团和折叠方法。在线性肽的合成过程中，应优化反应试剂，减少副产
方案6－用水溶性金属复合体监控蛋白质蛋白质相互作用
实验材料待测蛋白质样品试剂、试剂盒过硫酸铵4 X 凝胶上样缓冲液甲醇PdCl25 X 反应缓冲液TMPyP三氟乙酸Tris-二吡啶钌仪器、耗材加热器光交联反应器SepPak C18 容器分光光度计注射器滤膜实验步骤一、用 Pd（Ⅱ）金属化 TMPyP1.将 1mg (1.2umol) 的 TMPyP
多肽的固相合成、切割及纯化
固相肽合成技术 实验材料 huBPP 试剂、试剂盒 氩气 二甲基甲
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题八十四
测定多肽,一般采用什么柱子?流动相是乙腈和水,还有微量的 TFA。特别是像类似三肽的短肽,应该怎么选择柱子?答:分子量不高的多肽一般选用常规 C18 柱就能测定,也有用离子交换柱、水性 C18 柱和 Hilic 亲水作用柱的。
方案2分析之前或之后对磷酸化多肽进行碱性磷酸酶处理
实验材料磷酸化多肽样品在溶液中保存试剂、试剂盒乙腈碱性磷酸酶甲酸MALDI 基质三氯乙酸仪器、耗材台式离心机去盐树脂MALDI 靶板质谱仪塑料盒加样吸头注射器实验步骤方法 A: 在 MALDI-MS 分析之前在溶液中去磷酸化的方法1.根据方案 1 中的附加方案，准备两个 nanoscale 去盐柱子
采用ACQUITY－UPLC－HClass系统的多元溶剂混合能力开发肽谱...
采用ACQUITY UPLC H-Class系统的多元溶剂混合能力开发肽谱图分析方法目标 ACQUITY UPLC ® H- Class 系统采用四元溶剂混合的自动化优化方案，对肽谱分析条件进行系统性优化。背景 肽谱分析用于确认某种蛋白质的一级结构，识别翻译后修饰（PTM），并分析杂质。任何蛋白质结
高速浓缩仪全面实现自动化
高速浓缩仪的浓缩是样品前处理过程中不可缺少的环节。在浓缩的过程中要求目标物损失少、回收率高、样品之间没有交叉污染、重复性好，传统的蒸发浓缩方式存在处理量小，自动化程度不足，容易出错等缺陷。GPC凝胶净化过程中产生大量的冲洗液，要求配套快速浓缩装置，进行定容。采用微电脑控制整个蒸发系统，可实现多样品
从修饰肽序列中判定修饰肽的溶解性方法
1.非HPLC纯化的修饰肽中有哪些杂质?答：粗品和脱盐级别的修饰肽中修饰肽和非修饰肽类杂质：如非全长修饰肽和修饰肽后处理的一些原料如DTT、TFA等。2.HPLC纯化的修饰肽有哪些杂质?答：经过HPLC纯化的修饰肽，仍会有一些一些杂质存在，其中的杂质主要是短肽和微量TFA。3.多长的修饰肽为合适?答
看完可自己动手的多肽合成操作规则实用教学
多肽合成又叫肽链合成，是一个固相合成顺序一般从C端(羧基端)向N端(氨基端)合成。 下面跟小编一起了解多肽合成的步骤： 1、树脂的选择及氨基酸的固定 用于多肽合成的高分子的载体主要有3类:交联聚苯乙烯；聚酰胺；聚乙烯乙二醇脂类树脂。氨基酸的固定主要是通过保护的氨基酸的羧基
蛋白质自动测序仪的工作原理
蛋白质测序仪主要检测的是蛋白质一级结构（氨基酸序列），其基本原理沿用艾德蒙（Edman）化学降解法，这也是经典的蛋白质测序方法。利用 Edman化学降解法测定蛋白质或多肽N末端序列，在测定过程中，氨基酸残基依次与异硫氰酸苯酯（PITC）作用，从蛋白质N末端依次切割下来，形成稳定的PTH氨基酸后进
为何出现鬼峰？
①进样阀残余峰--每次用后用强溶剂清洗阀，改进阀和样品的清洗; ②样品中未知物--处理样品; ③柱未平衡--重新平衡柱,用流动相作样品溶剂(尤其是离子对色谱); ④三氟乙酸(tfa)氧化--每天新配，用抗氧化剂; ⑤水污染(反相)--通过变化平衡时间检查水质量
固相合成法制备抗原肽环肽
1.1 仪器与试剂多肽合成仪(CS536，美国CSBio公司)，半制备型高效液相色谱仪(Waters Delta Prep4000，美国Waters公司)，分析型高效液相色谱仪(Agilent 1100，美国Agilent公司)，冷冻干燥机(Christ Alpha，德国Christ公司)
为何液相色谱试验时出现鬼峰
（1）进样阀残余峰--每次用后用强溶剂清洗阀，改进阀和样品的清洗； （2）样品中未知物--处理样品； （3）柱未平衡--重新平衡柱,用流动相作样品溶剂(尤其是离子对色谱)； （4）三氟乙酸(tfa)氧化--每天新配，用抗氧化剂； （5）水污染(反相)--通过变化平衡时间检查水质量，用HP
肽质量指纹图谱—MALDITOF－法鉴定蛋白质实验
实验材料测序级猪胰蛋白酶试剂、试剂盒碳酸氢铵碳酸氢铵缓冲液乙腈 碳酸氢铵缓冲液消化缓冲液仪器、耗材真空离心机烤箱实验步骤许多凝胶染色方法适用于后续的 MALDI-TOF 肽质量指纹图谱（PMF ) 分析。在第 14 章已经比较讨论了一些染色方法的性能和兼容性。3.1 胶内消化凝胶消化方法改编自 Je
肽质量指纹图谱—MALDITOF－法鉴定蛋白质实验
实验材料测序级猪胰蛋白酶 试剂、试剂盒碳酸氢铵 碳酸氢铵
实验室分析仪器HPLC－常见故障出现鬼峰的原因分析
1.进样阀残余峰 每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗 2.样品中未知物 处理样品 3.柱未平衡 重新平衡柱,用流动相作样品溶剂 尤其是离子对色谱 4.三氟乙酸TFA氧化肽谱 每天新配,用抗氧化剂 5.水污染反相 通过变化平衡时间检查水质量,用HPLC级的水
制备色谱技术与操作（三）
12 问：分析HPLC如何放大到制备型HPLC？在分析液相中色谱柱的典型进样量是微克级，甚至更低。样品量和固定相之比有的甚至小于1:10000。进样体积一般来说都大大小于色谱柱体积（小于1:100）。 在这种条件下，会达到很好的分离效果，峰形尖锐并且很对称。分析系统线形放大到制备型HPLC意味着使用
蛋白质内序列分析用肽段的分离与纯化实验
分子生物学中最重要的环节之一是对微量蛋白质进行分析，使对编码待研究蛋白的 cDNA 序列的克隆成为可能。为有效地做到这一点，通常需要知道蛋白质的内序列。在这一方面，肽段的有效分离是极重要的。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。试剂、试剂盒考马斯亮蓝 G乙酸甲醇Achromobacte