植物组织制备基因组DNA实验
实验方法原理 加入一定量的异丙醇或乙醇,基因组的大分子DNA即沉淀形成纤维状絮团飘浮其中, 可用玻棒将其取出,而小分子DNA则只形成颗粒状沉淀附于壁上及底部, 从而达到提取的目的。实验材料 植物组织试剂、试剂盒 抽提缓冲液十二烷基肌氨酸钠TE异丙醇溴化乙锭氯化铯仪器、耗材 离心机实验步骤 收取10~50 g 新鲜的植物组织。2. 植物组织用冷的无菌水洗涤、吸干,放人液氮中冻结,用研钵和研杵研成细粉。3. 将冻结的细粉放入250 ml 的离心瓶中,立即加入抽提缓冲液约每克植物5~10 ml,轻轻搅拌混匀。4. 加入十二烷基肌氨酸钠使终浓度达1%,于温育1~2 h。5. 用JA-14转子4℃,5 500 g 离心10min 保留上清,必要时重复此歩骤以除去残渣。6. 加人0.6体积异丙醇,混合,如果看不见沉淀,于-20℃......阅读全文
植物DNA提取实验
机械法 实验方法原理 这是一种快速简便提取植物总DNA的方法。先将新鲜的叶片在液氮中研磨,以机械力破碎细胞壁,然后加入十六烷三甲基溴化铵分离缓冲液,使细胞膜破
SDS法提取植物基因组DNA
本方法由Dellaporta,Wood和Hicks(1983)的方法修改而成。其基本原理是研磨的组织细胞用热的SDS裂解后,加入高浓度的KAc,0℃放置以除去蛋白和多糖类杂质,最后用乙醇或异丙醇沉淀。一 材料、试剂和仪器1 材料 新鲜的组织材料或-80℃冻存的材料2 试剂(1)提取缓冲液Tris-H
质粒DNA大量制备实验
实验方法原理 这一方案科能是最常用的质粒制备方法,该法不仅相当决捷可靠,而且可获得相当纯净的粗制DNA。实验材料 大肠杆菌试剂、试剂盒 葡萄糖TrisEDTATENaOHSDS异丙醇乙醇乙酸甲仪器、耗材 离心机漩涡混合器水浴锅实验步骤 1. 往2 ml 烧瓶中加入500 ml ,含有适当抗生素的L
质粒DNA大量制备实验
碱裂解法 平衡离心法 实验方法原理 这一方案科能是最常用的质粒制备方法,该法不仅相当决捷可靠,而且可获得相当纯净的粗制DNA。
植物成熟组织观察实验
实验方法原理1. 掌握植物各种成熟组织的形态、位置、结构及功能。 2. 了解不同组织间的相互联系,维管束的结构与类型,植物组织离析法。实验材料番薯叶片 楝树枝条
植物成熟组织观察实验
实验方法原理1. 掌握植物各种成熟组织的形态、位置、结构及功能。2. 了解不同组织间的相互联系,维管束的结构与类型,植物组织离析法。实验材料番薯叶片楝树枝条萝卜根尖马铃薯块茎横切片南瓜茎纵横切片椴树茎切片梨果实玉米茎横切片试剂、试剂盒蒸馏水番红间苯三酚盐酸仪器、耗材显微镜载玻片盖玻片镊子刀片纱布
植物组织的观察实验
[目的要求] 1.掌握植物细胞有丝分裂和减数分裂各时期的特征。 2.掌握植物分生组织和各种成熟组织的形态、位置、结构及功能。 3.学习简单地离析组织的方法。 [材料用品] 材料:蚕豆叶、烟草叶、玉米叶、小麦叶、水稻叶、椴树茎横切片
实验动物组织标本的制备实验
实验材料 家兔豚鼠白鼠试剂、试剂盒 营养液仪器、耗材 注射器线浴槽实验步骤 通常选用家兔、豚鼠、大白鼠或小白鼠等动物,禁食24 小时。击头致昏,以避免麻醉或失血对胃肠道机能的影响。立即打开腹腔,取出所需的胃、肠、胆囊等。去除附着的系膜或脂肪等组织。迅速放入充氧(或95%O2+5%CO2
动物组织细胞基因组DNA提取
一、实验原理真核生物的一切有核细胞(包括培养细胞)都能用来制备基因组 DNA.真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内,因此,制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离,又要保持DNA分子的完整。提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS(十二烷基硫酸钠)和蛋白酶K的溶液
动物组织细胞基因组DNA提取
一、实验原理真核生物的一切有核细胞(包括培养细胞)都能用来制备基因组 DNA。真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内,因此,制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离,又要保持DNA分子的完整。提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS(十二烷基硫酸钠)和蛋白酶K的溶液
植物RNA的制备实验
实验材料 RNA试剂、试剂盒 TELiCl无水乙醇乙酸钠氯仿仪器、耗材 匀浆器离心管离心机水浴锅实验步骤 1. 研钵和研棒先用液氮冷却,称出15 g 冻结植物组织于研钵中(加液氮保持冻结)。2. 用研棒磨成粉末,立即转移到一个盛有150 ml,研磨缓冲液和50 ml TLE缓冲液平衡酚的500
植物RNA的制备实验
酚/SDS法 实验材料 RNA 试剂、试剂盒
动物细胞基因组DNA的制备
实验概要本实验介绍了动物细胞基因组DNA的制备原理及操作流程。本方法一般可从5×107培养的非整倍体细胞(如HeLa细胞)中获得大约200μg DNA。DNA的长度可达到100~150kb。20ml正常血的DNA产量约为250μg。实验原理真核生物的一切有核细胞(包括培养细胞)都能用来制备基因组
植物组织中DNA的提取与测定
一、原理 脱氧核糖核酸(deoxyribonucleicacid,DNA)是一切生物细胞的重要组成成分,主要存在于细胞核中,盐溶法是提取DNA的常规技术之一。从细胞中分离得到的DNA是与蛋白质结合的DNA,其中还含有大量RNA,即核糖核蛋白。如何有效地将这两种核蛋白分开是技术的关键。D
利用CTAB法提取植物基因组DNA
一、实验原理 CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)是一种去污剂,可溶解细胞膜并能与核酸形成复合物,该复合物在高离子强度(0.7mol/L)的溶液里是可溶的,通过离心可将复合物同蛋白质、多糖类物质分开。在酚仿变性的条件下,去除残留的CTAB和蛋白质等杂质,然后利用异戊醇或无水乙醇将DNA分
冰冻组织制备及切片实验
实验材料 冰冻组织试剂、试剂盒 异戊烷OCT多聚-L-赖氨酸仪器、耗材 滤纸切片机加热槽冰冻机细毛刷实验步骤 1. 将一个50 ml 硬质玻璃烧杯浸入盛有液氮的烧瓶(或敞口聚苯乙烯盒)中冰冻,烧杯中加CryoKwik(或异戊烷)。2. 在滤纸条一端以铅笔注明标签,用镊子将样品放于另一端。 3.
冰冻组织制备及切片实验
实验材料冰冻组织试剂、试剂盒异戊烷OCT多聚-L-赖氨酸仪器、耗材滤纸切片机加热槽冰冻机细毛刷实验步骤1. 将一个50 ml 硬质玻璃烧杯浸入盛有液氮的烧瓶(或敞口聚苯乙烯盒)中冰冻,烧杯中加CryoKwik(或异戊烷)。2. 在滤纸条一端以铅笔注明标签,用镊子将样品放于另一端。 3. 保证C
实验技术:组织切片的制备
【目的】组织标本必须首先被制成组织切片,再经过染色处理,然后才能在显微镜下进行临床诊断和科学研究。【原理】苏木素染色结合伊红染色是常规组织学染色技术,也称为H & E染色。苏木素是碱性染色,细胞核被染成深紫或兰色,常用作核染色;伊红是酸性染色,细胞浆染呈红色,常用作胞浆染色。【材料】1.试剂和溶液(
鲑精担体DNA制备实验
基本方案 实验材料 鲑精DNA 试剂、试剂盒
质粒DNA的小量制备实验
实验方法原理 碱裂解法是最常用的小量制备质粒DNA的方法。实验材料 培养基试剂、试剂盒 EDTASDS乙醇VTE仪器、耗材 平板实验步骤 1. 接种一个单菌落于5 ml无菌LB培养液中,在37°C培养至饱和状态(过夜)。2. 取1.5 ml培养液以最大转速离心20 S。弃上清。3. 沉淀用10
DNA-亲和介质的制备实验
试剂、试剂盒ATP[y-32P]ATPT4多核苷酸激酶乙酸铵乙醇酚 氯仿氯仿 异戊醇NaOAcT4 DNA连接酶酚异丙醇重蒸水Sepharose CL-2B溴化氰NN-二甲基甲酰胺NaOH磷酸钾KClCNBr-活化的Sepharose*.4BHClT4 多核苷酸激酶缓冲液TE接头-激酶缓冲液乙醇胺-
制备DNA测序模板实验
制备单链M13噬菌体DNA 小量裂解物中制备λ噬菌体DNA 双脱氧测序的双链质粒DNA的碱变性 实验材料 大肠杆菌
鲑精担体DNA制备实验
利用这一方案可获得剪切好的高质量鲑精担体DNA,它可用于转化实验和其他需要高质量担体DNA的实验中。实验材料鲑精DNA试剂、试剂盒TE酚氯仿乙酸钠仪器、耗材离心机摇床超声仪实验步骤1. 将TE缓冲液加入装有干燥鲑精DNA的烧杯中,至鲑精DNA浓度为5~10 mg/ml。用10 ml 吸管反复吹打后
鲑精担体DNA制备实验
实验材料 鲑精DNA试剂、试剂盒 TE酚氯仿乙酸钠仪器、耗材 离心机摇床超声仪实验步骤 1. 将TE缓冲液加入装有干燥鲑精DNA的烧杯中,至鲑精DNA浓度为5~10 mg/ml。用10 ml 吸管反复吹打后,用搅拌棒于4℃搅拌过夜,最终获得一种均匀粘稠液体。 2. 将一个较大的超声波探头插入烧杯
DNA-亲和介质的制备实验
DNA 亲和介质的制备实验 试剂、试剂盒 ATP [y-32P]ATP T4多核苷酸激酶
制备DNA测序模板实验
实验材料 大肠杆菌试剂、试剂盒 LBTEM13聚乙二醇容易让顶层琼脂乙酸钠乙醇仪器、耗材 巴斯德吸管试管离心机实验步骤 1. 如果起始用M13复制型DNA或M13单链DNA,以0.5 ng 重组M13mp复制型DNA或5~10 ng 单链DNA转化40 μl 感受态大肠杆菌DH5αF'株
质粒DNA的小量制备实验——
实验采用国产的质粒小量抽提试剂盒。它是一种新型的离子交换柱,在特定的条件下,使质粒能在离心过柱的瞬间,结合到质粒纯化柱上,在一定条件下又能将质粒充分洗脱,从而实现质粒的快速纯化。实验材料DNA试剂、试剂盒LB培养基卵清溶菌酶异丙醇TE仪器、耗材离心机漩涡混合器水浴锅实验步骤一、实验步骤1. 接种一
质粒DNA的小量制备实验
实验方法原理 当菌体在NaOH和 SDS溶液中裂解时,蛋白质与DNA发生变性,当加入中和液后,质粒DNA分子能够迅速复性,呈溶解状态,离心时留在上清中;蛋白质与染色体DNA不变性而呈絮状,离心时可沉淀下来。碱裂解法是最常用的小量制备质粒DNA的方法。实验材料 细菌克隆试剂、试剂盒 LB培养基抗生素葡
质粒DNA的大量制备实验
碱裂解法 氯化铯/溴化乙锭平衡离心法 层析法 实验方法原理 大量碱裂解方法不仅相当快捷可靠,而且可获得相当纯净的粗制DNA。煮沸法的大量制
质粒DNA的小量制备实验
碱裂解小量制备法 煮沸法 实验材料 DNA 试剂、试剂盒