蛋白组学入门问题酶解篇
蛋白组学入门问题-转自上海生科院 酶解篇1. 用 Trypsin 酶解蛋白质时，碳酸氢氨的浓度应该是多少？ 酶解时碳酸氢氨的浓度一般在 10 ～ 50 mM 之间。碳酸氢氨的作用主要是提供一个碱性的水解环境，因为 Typsin 的活力在 pH8 ～ 9 之间最高。最常用的碳酸氢氨浓度有 20 mM ， 40 mM 。盐浓度过大时，后续的冻干过程中会有较多的盐析出；盐浓度过小时，则不能有效的提供碱性 pH 的水解环境（尤其是在样品的 pH 值低，而且体积大时）。为了确定酶解体系的 pH 值，可以用 2. Trypsin 储存液的作用是什么？ Trypsin 在 pH8 ～ 9 活力最高，所以为了防止酶的自水解， Trypsin 母液要处于一个酸性的环境里以便长期保存。 Trypsin 储存液的 pH 大约是 5.3 ，是用来稀释母液用的。如果所需的酶量较大，可以直接用碳酸氢氨溶液来稀释母液。如果酶解的样品少，可以用储存液来稀释，......阅读全文
ThermoFisher推出Proteome－Discoverer蛋白质组学软件
Thermo Fisher推出Proteome Discoverer：前沿蛋白质组学研究的突破性生物软件 质量信息学平台提供了强大的分析、开放和灵活架构，易于使用的界面 2008年5月30日，圣何塞，服务科学，世界领先的赛默飞世尔科技公司，今天宣布将在ASMS 2008（第56届美国质谱大会）上
用－Trypsin－酶解蛋白质时，碳酸氢氨的浓度应该是多少？
酶解时碳酸氢氨的浓度一般在 10 ～ 50 mM 之间。碳酸氢氨的作用主要是提供一个碱性的水解环境，因为 Typsin 的活力在 pH8 ～ 9 之间最高。最常用的碳酸氢氨浓度有 20 mM ， 40 mM 。盐浓度过大时，后续的冻干过程中会有较多的盐析出；盐浓度过小时，则不能有效的提供碱性
胰蛋白酶(trypsin）纯化
［原理］胰蛋白酶与另外两种蛋白水解酶：糜蛋白酶（胰凝乳蛋白酶）和弹性蛋白酶同时存在于胰脏中。由于胰蛋白酶、糜蛋白酶和弹性蛋白酶的酶蛋白分子在结构上及其它很多性质上的相似之处，往往在一般的制备过程中很难将它们彼此彻底分开，传统的分离、纯化技术难以达到十分满意的结果，但采用亲和层析技术，大大提高了分离纯
单抗药物的分子质量、氨基酸序列以及糖基化位点鉴定－二
质谱分析条件：具体见表 4； 表 3. 氨基酸序列测定的色谱分析条件表 4. 氨基酸序列测定的质谱分析条件 2.2.3 数据分析方法采用 Proteome Discoverer 1.3 软件对原始谱图进行数据库搜索，具体搜库参数为：包含单抗氨基酸序列的数据库；半胱氨酸（C）烷基化（+57.021
鱼胰蛋白酶(trypsin)ELISA试剂盒操作步骤
我司ELISA试剂盒品质保证，质量优，价格实惠，是您生物实验的首选，如有需要可与我司销售人员联系。本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定鱼小肠内胰蛋白酶 (trypsin)的活性。实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鱼胰蛋白酶 (trypsin)水平。用纯化的鱼胰蛋白酶 (trypsin)
基于QOTqIT质谱系统的蛋白质组学快速鉴定（一）
摘要 随着“一小时酵母蛋白质组”的实现, 短梯度下实现蛋白质组深度覆盖成为可能。本文利用全新Q-OT-qIT三合一质谱系统进行“一小时蛋白质组”分析与优化。50 min有效梯度, 单次实验分别从1 μg和50 ng HeLa全蛋白中鉴定到20860和14100条肽段, 对应到3865和287
酶解方法有哪些
试剂配制，银染酶解方法，银染酶解方法
蛋白质在酶解过PH值下降的原因及原理
肽键酶解分解成：-COOH和-NH2。-COOH在溶液中电离出H+。故PH值下降
Trypsin－储存液的作用
Trypsin 在 pH8 ～ 9 活力最高，所以为了防止酶的自水解， Trypsin 母液要处于一个酸性的环境里以便长期保存。 Trypsin 储存液的 pH 大约是 5.3 ，是用来稀释母液用的。如果所需的酶量较大，可以直接用碳酸氢氨溶液来稀释母液。如果酶解的样品少，可以用储存液来稀释，
鱼胰蛋白酶(trypsin)ELISA试剂盒使用说明
本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定鱼小肠内胰蛋白酶 (trypsin)的活性。实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鱼胰蛋白酶 (trypsin)水平。用纯化的鱼胰蛋白酶 (trypsin)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入胰蛋白酶 (trypsin)，再与HRP标
方案13－胶内蛋白质的酶解和肽段提取实验
实验材料在二维凝胶电泳中分离的蛋白质试剂、试剂盒胶内胰酶消化缓冲液三氟乙酸（TFA)仪器、耗材冷冻干燥离心机小离心管水浴锅实验步骤1.切下凝胶上的蛋白质点，放人小离心管中。2.以 0.lmol/L NH4HCO3、50% 乙腈（用于胰酶）或 0.05mol/L Tris-HCl(PH9.3)、50%
融合蛋白的酶解实验
实验材料 融合蛋白试剂、试剂盒 SDS仪器、耗材 水浴锅培养箱离心机实验步骤 1. 准备两个小量预试验反应以确定最佳温育时间： （1）反应1：20 μl 含有1 μl 200 μg/ml Xa因子的1 mg/ml 融合蛋白，室温下反应（2）反应2：5 μl 不含因子Xa的1 mg/ml 融合蛋白（
融合蛋白的酶解实验
基本方案 辅助方案 备选方案1 辅助方案 备选方案2 备选方案3 实验材料 融合蛋白
蛋白质组和蛋白质组学分析
随着人类基因 组计划研究成果的公布，人们对基因的认识逐渐清晰，但基因数量的有限性和基因结构的相对稳定性，与生命现象的复杂性和多样性之间存在巨大反差。如何了解众多的基因与危害人类身心健康的疾病之间的关系，对生命科学研究者来说仍是一项长期而艰巨的任务。因此，作为生命活动的直接承担者――蛋白质，成为后基
融合蛋白的酶解实验1
实验材料 融合蛋白 试剂、试剂盒 SDS 仪器、耗材 水浴锅培养箱离心机 实验步骤 1. 准备两个小量预试验反应以确定最佳温育时间： （1）反应1：20 μl 含有1 μl 200 μg/ml Xa因子的1 mg/ml 融合蛋白，室温下反应
融合蛋白的酶解实验2
实验材料 融合蛋白 试剂、试剂盒 SDS盐酸胍CaCl2 仪器、耗材 水浴锅培养箱离心机 实验步骤 1. 将融合蛋白在≥10倍体积的20 mmol/l Tris·Cl（pH7.4）/6 mol/l 盐酸胍中透析4 h，或将盐酸胍加入融合蛋白中至终浓度
融合蛋白的酶解实验4
实验材料 融合蛋白 试剂、试剂盒 SDS盐酸胍CaCl2 仪器、耗材 水浴锅培养箱离心机 实验步骤 1. 将融合蛋白在≥10倍体积的20 mmol/l Tris·Cl（pH7.4）/6 mol/l 盐酸胍中透析4 h，或将盐酸胍加入融合蛋白中至终浓度
融合蛋白酶解实验
基本方案 用 Xa 因子 实验方法原理 实验材料 1 mg／ml 融合蛋白
融合蛋白的酶解实验3
实验材料融合蛋白试剂、试剂盒SDS钠盐凝血酶裂解液凝血酶仪器、耗材水浴锅培养箱离心机实验步骤1. 准备两个小量预试验以确定最佳裂解反应条件： （1）反应1：20 μl 1 mg/ml 融合蛋白溶液（在合适的缓冲液中）及0.2 μg 凝血酶。（2）反应2：5 μl 1 mg/ml 融合蛋白溶液（模拟
融合蛋白的酶解实验6
实验材料融合蛋白试剂、试剂盒SDSCaCl2重组牛肠激酶仪器、耗材水浴锅培养箱离心机实验步骤1. 做预试验监测肠激酶与融合蛋白按不同比例混合后的裂解效率，准备5个反应体系： （1）反应1至4：20 μl 融合蛋白；0.2 U、0.5 U、1 U和2 U的rEK，加50 mmol/l Tris·Cl
融合蛋白的酶解实验5
实验材料融合蛋白试剂、试剂盒SDSGST清洗缓冲液GST洗脱缓冲液仪器、耗材水浴锅培养箱离心机实验步骤1. 在20或50 ml 带球旋盖的试管中，用20倍体积含1%Triton X-100的PBS液洗涤结合在谷胱甘肽-琼脂糖珠的GST融合蛋白。室温下，在台式离心机上以500 g 离心10 s 沉淀
融合蛋白酶解实验
实验方法原理 实验材料 1 mg／ml 融合蛋白试剂、试剂盒 200 μg Xa 因子／ml 反应缓冲液2 × SDS 样品缓冲液仪器、耗材 沸水浴实验步骤 准备两个小量预试验反应以确定最佳温育时间。反应 1:20 μl 含有 1 μl 200μg /ml Xa 因子的 1 mg/ml 融合蛋白反应
J－Proteome－Res:－代谢组学应用于微囊藻毒素代谢研究
微囊藻毒素(MCLR)，作为一种肝毒素，正在威胁着人类的公共卫生安全。在体内，肝脏是MCLR主要攻击的器官，然而具体代谢变化目前任然未知。近日，中国科学院水生生物研究所谢平等研究人员在与上海敏芯信息科技公司的合作下，通过对灌服MCLR的大鼠模型进行代谢组学的研究，向我们揭示了MCLR扰乱肝脏代谢
蛋白质质谱鉴定技术概述及常见问题
蛋白质（Protein）是生物体中含量最高，功能最重要的生物大分子，存在于所有生物细胞，作为生命的物质基础之一，蛋白质在催化生命体内各种反应进行、调节代谢、抵御外来物质入侵及控制遗传信息等方面都起着至关重要的作用，因此蛋白质也是生命科学中极为重要的研究对象。现代研究结果发现越来越多的多肽同蛋白质一样
蛋白质组与蛋白质组学简介2
3 甲基化干扰实验用来检测蛋白质的结合位点。甲基化修饰的DNA探针可以干扰蛋白质的结合。结合位点上未被修饰的DNA片段才能与蛋白结合，然后将DNA从被修饰的碱基处切割，电泳分离，结合蛋白的DNA在结合位点上不能被修饰，不能切断，可确定结合位点的位置。 4 Dnase I 足纹分析 蛋白
蛋白质组与蛋白质组学简介1
一、蛋白质组概念：一个细胞、一个组织或一个机体全部基因所表达的全部蛋白质。 二、蛋白质组学研究范畴 1.蛋白质和蛋白质间 2.蛋白质和核酸之间 3.蛋白质及其组成质点的分离、分析、鉴定 4.蛋白质结构分析 5.生理、病理或不同发育状态下蛋白质组表
ETDtriggered－CID－方法应用于融合蛋白的二硫键分析（二）
2.3 数据分析方法使用 Proteome Discoverer 1.3 软件对原始谱图进行数据库搜索，具体参数如下，流程图如图 2 所示：数据库：融合蛋白对应的氨基酸序列；一级质量偏差：20 ppm；二级质量偏差：0.02 Da；三级质量偏差：0.8 Da；酶：trypsin+Chymotrysp
磷酸化蛋白质组鉴定技术路线及经典案例
蛋白质翻译后修饰（PTMs）几乎参与了细胞所有正常生命活动的过程，并发挥十分重要的调控作用。蛋白修饰已经成为国际上蛋白质研究的一个极其重要的领域，目前研究比较成熟的有磷酸化、乙酰化、糖基化、泛素化等。蛋白质磷酸化是生物体中最常见、最重要的一种蛋白质翻译后修饰方式，它可以通过激发、调节诸多信号通路进而
“鸟枪法(shotgun)”定量蛋白质组学技术
1999年，Yates研究组提出“鸟枪法”(shotgun)，其基本技术路线是针对液体或SDS-PAGE条带的复杂混合物用酶(Trypsin)酶解成肽段混合物，然后对肽混合物进行多维毛细管液相色谱分离和串联质谱分析以及数据库检索，从而确定蛋白质的种类，可同时鉴定成百上千种蛋白质。他们把这种思路称
蛋白质质谱鉴定技术概述及常见问题解决方法
蛋白质（Protein）是生物体中含量最高，功能最重要的生物大分子，存在于所有生物细胞，作为生命的物质基础之一，蛋白质在催化生命体内各种反应进行、调节代谢、抵御外来物质入侵及控制遗传信息等方面都起着至关重要的作用，因此蛋白质也是生命科学中极为重要的研究对象。 现代研究结果发现越来越多的多肽