不同标记与非标记蛋白质组学定量准确性分析研究

通过质谱法进行定量蛋白质组分析为生物医学探索研究提供非常重要的途径。 然而,了解生物样品中的定量限制对于准确判断结果非常重要。通过使用加入已知浓度的蛋白质标准品的复杂样本,科学家们研究了无标记(label free)和基于标记(TMT和iTRAQ)的肽定量的定量限制,包括前体混合的评估及其对同重元素标记的定量准确性的影响。 使用哺乳动物细胞系作为背景制备样品,其中分别加入不同的蛋白质标准品(共57种)。蛋白质标准品含有48种人蛋白质,每6种蛋白质混合加入一组样本,标准品蛋白的量覆盖5个数量级范围(从50pmol至500amol)。混合物以8个线性梯度稀释,得到0-25000fmol的蛋白质量。 另外9种蛋白质,其中3种非哺乳动物:P14R(合成的),TPI和MBP B-Gal(大肠杆菌)以等摩尔浓度混合,并以8个Log4浓度覆盖0-15000fmol。image004.jpg相同样本通过label free方法鉴定了338......阅读全文

不同标记与非标记蛋白质组学定量准确性分析研究

  通过质谱法进行定量蛋白质组分析为生物医学探索研究提供非常重要的途径。 然而,了解生物样品中的定量限制对于准确判断结果非常重要。通过使用加入已知浓度的蛋白质标准品的复杂样本,科学家们研究了无标记(label free)和基于标记(TMT和iTRAQ)的肽定量的定量限制,包括前体混合的评估及其对同重

蛋白质标记

Biosynthetic labeling (Sefton Lab)Biotinylation of Antibody (Contributed by Nanci Donacki)125I Labeling of Protein using ICl (ScienceXchange)Protein (

非荧光标记的遗传标记分析技术

近年来,美国GENTEON公司采用激光致导的动态荧光检测技术(Dynamic fluorescence),结合多通道毛细管电泳技术,研制出Capella 400型全自动基因分析系统。该仪器采用动态荧光检测技术,彻底消除了传统荧光DNA标记检测的高成本和复杂性,可精确有效到检测未经标记的单链或双链核苷

非放射性标记探针的双重标记原位杂交

     如果用不同的标记物标记不同的核酸探针,只要互相不影响各自的杂交反应,检测系统也不相互干扰,杂交信号易于分辨,原则上均能用于双重或多重标记原位杂交。应用非放射性标记探针的双重标记原位杂交。可克服放射性核素标记探针的分辨率低、时间长以及放射性污染等缺点。    1.应用生物素标记探针的双重标记

3-抗体标记服务/蛋白标记/小分子标记/荧光标记/多肽标记,1mg

3 抗体标记服务/蛋白标记/小分子标记/荧光标记/多肽标记,1mg服务内容1 可接收的待标记样品抗体小分子/多肽/抗体/蛋白2 可提供标记服务的标记物酶标记物: AP/ALP,HRP;生物素;常规荧光素:FITC,Rhodamine B;Cy系列荧光素:Cy3,Cy5,Cy5.5,Cy7;Alexa

PCR扩增标记法探针标记

PCR扩增标记法探针标记     PCR扩增标记法的原理与普通的核酸PCR相同。即Taq DNA多聚酶以DNA为模板,在特异引物引导下,在PCR仪中合成cDNA探针。由于在反应体系中加入一定量的标记dNTP,因此扩增的同时又是一个标记过程。cDNA探针PCR扩增法标记原理

蛋白质的胶体金标记

当蛋白质的最适稳定量及标记的最佳pH值被确定以后,便可进行标记。具体步骤如下。(1)根据标记所用胶体金的总量计算出所需要待标记蛋白质的总量。(2)边搅拌边将蛋白质溶液加入胶体金溶液中,逐渐加入,lmg的蛋白质量大约需5min,或在搅拌下将胶体金逐渐加入到蛋白质溶液中,大约需5~10min。(3)继续

蛋白质的胶体金标记

当蛋白质的最适稳定量及标记的最佳pH值被确定以后,便可进行标记。具体步骤如下。(1)根据标记所用胶体金的总量计算出所需要待标记蛋白质的总量。(2)边搅拌边将蛋白质溶液加入胶体金溶液中,逐渐加入,lmg的蛋白质量大约需5min,或在搅拌下将胶体金逐渐加入到蛋白质溶液中,大约需 5~10min。(3)继

靶蛋白的放射标记实验—酵母和细菌蛋白质代谢放射标记

实验材料 细胞 仪器、耗材 基本培养基 实验步骤 1. 接种细胞于只含有必需氨基酸和辅因子的已知成分的基本培养基,于合适温度中度振荡培养过夜。 2. 用新鲜的基本培养基稀释培养物,继续温育至 107 细胞/ml (酵母)或对数期中期(细菌)。 3. 5000

非放射性标记的方法介绍

中文名称非放射性标记英文名称nonradiometric labeling;nonradioactive labeling定  义用荧光、显色物质或稳定性同位素等非放射性物质代替放射性核素对化合物进行的标记。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)

非放射性地高辛标记DNA探针法

实验概要掌握非放射性地高辛标记DNA探针法。  实验原理以往人们是用放射性同位素来标记探针DNA。近年来,非同位素标记方法发展很快,已有取代同位素标记法的趋势。地高辛配基随机标记DNA探针法,是较为成功的一种非同位素标记方法(Saiki等,1985)。其原理是:用化学方法把类固醇类半抗原地高辛分子连

单克隆抗体的标记(酶标记、荧光素标记、同位素标记和...2

单克隆抗体的标记(酶标记、荧光素标记、同位素标记和生物素标记)(3)移入透析袋中,在1000ml 0.01mol/L PH9.5碳酸盐缓冲液中,4℃透析过夜,更换三次缓冲液,注意避光。 (4)吸取上述醛化好的HRP溶液3ml,加入5mg IgG的碳酸盐缓冲液1ml,室温轻搅2-3小时,避光;加入5m

单克隆抗体的标记(酶标记、荧光素标记、同位素标记和...1

目前动物用单抗,在动物疫病诊断和检疫、妊娠检测、性别鉴定等方面有广泛的应用,大多以诊断试剂(盒)的形式提供,其中核心试剂为标记的单抗。下面将介绍最常用的几种标记技术。 一、酶标记 1、辣根过氧化物酶(HRP)标记 辣根过氧化物酶(HRP)标记单抗和多克隆抗体的常用方法是过碘酸钠法。其原理是HRP的糖

RNA标记

RNA labeling (Amersham Pharmacia)For the generation of radiolabelled, single stranded RNA for use as hybridization probes  32P-pCp 3' End-labeling

DNA标记

DNA标记(主要内容如下)  DNA Labeling by Nick Translation  Random Primed Labeling  End-Labeling  Purification of Labeled DNA  Non-isotopic Labeling  OthersDNA L

分子标记

内容:一、遗传标记 二、DNA分子标记 三、染色体原位杂交 四、DNA分子标记的应用 长期以来,植物育种中选择都是基于植株的表型性状进行的,当性状的遗传基础较为简单或即使较为复杂但表现加性基因遗传效应时,表型选择是有效的。但水稻的许多重要农艺性状为数量性状,如产量等;或多基因控制的质量性状,如抗性等

RNA标记

RNA标记是将标记物(如放射性同位素、荧光素或酶)共价地连接到RNA,通过检测标记物,进而实现对RNA鉴别和检测的目的。RNA标记在分子探针领域应用广泛,在疾病诊断方面也很有前景。 理想的RNA标记方法应符合以下要求: 1.  操作简单,灵敏度高 2.  不影响碱基配对的特异性 3.  不影响RN

胶体金标记蛋白质的纯化

标记好的免疫金探针必须经过纯化处理才能用于IHC染色,尤其是免疫电镜的染色。纯化的目的就是除去其中未标记的蛋白质,未充分标记的胶体金及在标记过程可能形成的各种聚合物。其纯化方法有超速离心法、色谱柱法以及以上二者相结合应用。(一)超迷离心法根据胶体金颗粒大小不同及蛋白质种类不同,离心的转速和时间也不同

蛋白质的生物合成标记实验

实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 甲硫氨酸PBS仪器、耗材 培养箱离心管实验步骤 1.  培养悬浮细胞至对数增长期,室温300 g 离心5 min。回收107~108细胞。 2.  每2×107细胞用约10 ml 37℃的短时间标记培养基在圆锥型试管中洗涤,于室温300 g 离心5 min 回收细胞,小

蛋白质的生物合成标记实验

甲硫氨酸短时间标记悬液中的细胞 甲硫氨酸短时间标记贴壁培养细胞 甲硫氨酸对细胞进行脉冲追踪标记             实验材料 蛋白质

蛋白质的生物合成标记实验

甲硫氨酸短时间标记悬液中的细胞 甲硫氨酸短时间标记贴壁培养细胞 甲硫氨酸对细胞进行脉冲追踪标记             实验材料 蛋白质

分子遗传学词汇非选择性标记

微生物遗传学上:观察者在一次试验中没有使用的,观察对象具体的(遗传)标记。

全套抗体标记工具全套抗体和蛋白质标记试剂盒的使用2

     方便的设计以取得最大的效果:         ReadiLink™快速抗体标记试剂盒利用胺反应性标记来制备共价标记的结合物。这些反应性标记选择性地靶向并结合至目标抗体上的伯胺(例如赖氨酸残基)。要标记您的抗体,只需将您的抗体溶液(浓度约1 mg / mL)与ReadiLink™

全套抗体标记工具全套抗体和蛋白质标记试剂盒的使用1

     用特定标签标记抗体已成为生物科学和医学研究中的重要且常规程序,标签的范围从视觉标记(例如荧光染料)到半抗原分子(例如生物素),标签的作用有增强免疫复合物和蛋白质-蛋白质相互作用的可见性,以及用于蛋白质的分离和纯化。        在确定选择哪种标签类型时,应侧重于抗体的下游应用。荧光标

全套抗体标记工具全套抗体和蛋白质标记试剂盒的使用3

       表2. ReadiLink™xtra快速抗体标记试剂盒  名称 Ex(nm) Em(nm) 规格 货号 ReadiLink™xtra Rapid iFluor™350抗体标记试剂盒 344 4

免疫标记技术常用的标记物介绍

  常用的标记物有荧光素、酶、放射性核素及胶体金等。免疫标记技术具有快速、定性或定量甚至定位的特点,是应用最广泛的免疫学检测技术。  常用的免疫荧光素主要有:  1 .异硫氰酸荧光素 (FITC) ,最大吸收光谱为 490~495nm ,最大发射光谱为 520~530nm ,呈黄绿色荧光。  2 .

头发中独特蛋白质标记可识别身份

  DNA检测技术已在寻找罪犯方面发挥很大威力。但DNA检测是找到犯罪分子的唯一手段吗?美国一项最新研究称,头发中的独特蛋白质标记同样可以用于身份识别,让那些犯罪分子无所遁形。   每个人的DNA都是独一无二的,这是DNA检测常用于犯罪调查或考古研究的原因所在。但这一手段也存在不足,因为随着时间的流

重组蛋白质的代谢标记实验

实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 胎牛血清甲硫氨酸半胱氨酸仪器、耗材 培养瓶离心机转子实验步骤 1.  接种2.5×106细胞于盛有4 ml 含10%胎牛血清的完全培养液的60 mm 肌组织培养皿中。对每一假定重组病毒分别准备一个平皿供感染用,并准备一个对照平皿供野生型杆状病毒感染。于27℃温育

重组蛋白质的代谢标记实验

基本方案             实验材料 蛋白质 试剂、试剂盒

头发中独特蛋白质标记可识别身份

  DNA检测技术已在寻找罪犯方面发挥很大威力。但DNA检测是找到犯罪分子的唯一手段吗?美国一项最新研究称,头发中的独特蛋白质标记同样可以用于身份识别,让那些犯罪分子无所遁形。   每个人的DNA都是独一无二的,这是DNA检测常用于犯罪调查或考古研究的原因所在。但这一手段也存在不足,因为随着时