生物素酰化探针的制备实验——切口平移法

在标准的切口平移实验体系中,生物素-11-dNTP取代了dNTP,DNA酶I 的浓度调整到可生成长100~500个核苷酸的范围,其他生物素酰化的核苷酸也可代替生生物素-11-dNTP。实验材料DNA试剂、试剂盒DNA聚合酶dNTP2-疏基乙醇生物素甘油NaClEDTASDS无水乙醇仪器、耗材注射器电泳仪离心机培养箱实验步骤1. 混合以下物质于100 μl 反应体积:(1)10 μl 10×大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ缓冲液(2)10 μl 0.5 mmol/l 3dNTP混合液(3)10 μl 0.5 mmol/l 生物素-11-dNTP贮存液(4)10 μl 0.5 mmol/l 2-ME(5)2 μg DNA(6)20 U 大肠杆菌聚合酶Ⅰ(7)DNA酶Ⅰ贮存液,用钱用冷水稀释1000倍(8)加水到100 μl,15℃温育2~2.5 h。2. &n......阅读全文

制备肌动蛋白实验

从肌肉制备丙酮粉用于纯化肌动蛋白 由骨骼肌丙酮粉制备肌动蛋白 将肌动蛋白纯化成纯品             实验材料 肌球蛋白

转基因小鼠制备实验

转基因小鼠制备实验可应用于:(1)动物发育研究;(2)研究细胞功能调控机制。实验方法原理遗传的基本物质是DNA,基因是位于染色体上有遗传效应的DNA片段,对于储存在生物全套染色体中的全部遗传信息,可称其为基因组。不同种类、不同个体的生物基因组成是不同的,对动物个体来说,非自身的基因成分属于外源基因,

制备电泳实验——连续电泳

仪器、耗材聚丙烯酰胺凝胶电泳琼脂糖电泳实验步骤1. 连续洗脱电泳使用连续洗脱的聚丙烯酰胺凝胶电泳或琼脂糖电泳能制备微克到毫克级的多肽,蛋白或核酸。装置可以是各种各样的。有的是把样品直接加在固体凝胶的表面,分子经过电泳分离后,由流动的缓冲液洗脱,纯化后的分子被浓缩,并由蠕动泵和部分收集器收集。2. 连

poly(A)+-RNA的制备实验

利用cND A微阵列技术可用于:(1)并行分析检测成千上万个基因的表达情况;(2)在新基因的发现、基因组功能的研究、疾病的预测和诊断、药物靶标的确定和药物毒性预测等多方面发挥着重要的作用。实验方法原理大多数的信使RNA(mRNA)都带有poly(A)尾,而结构RNA没有。使用本工作方案,可以将带po

转基因小鼠制备实验

实验步骤 1. 选取7~8周龄雌性小鼠,阴道口封闭,作为供体,下午3:00左右,每只小鼠腹腔注射PMSG(10 IU)。2. 47~48小时后,每只小鼠腹腔注射HCG(0.8 IU),并与正常公鼠合笼;另取数只适龄母鼠(2月龄以上)作为受体,阴道口潮红,与结扎公鼠合笼。3. 第二天上午9:00前观察

磷酸酶制备实验

蛋白丝/苏氨酸磷酸酶,1型和2A型(PP-1和PP-2A) 膜蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)             实验材料 细胞

制备肌动蛋白实验

实验材料 肌球蛋白试剂、试剂盒 肌球蛋白抽提溶液仪器、耗材 离心机实验步骤 1. 抽提肌球蛋白时得到的沉淀物用 3 倍于沉淀物体积的肌球蛋白抽提溶液抽提 10 分钟。肌球蛋白抽提溶液:0.5 mol/L KCl0.1 mol/L K2HPO42. 抽提物离心(GSA 转头,13000 r/min,1

poly(A)+-RNA的制备实验

            实验方法原理 大多数的信使RNA(mRNA)都带有poly(A)尾,而结构RNA没有。使用本工作方案,可以将带poly(A)的RNA从rRNA和tRNA中分离出来。 实验材料

转基因小鼠制备实验

1、 选取7~8周龄雌性小鼠,阴道口封闭,作为供体,下午3:00左右,每只小鼠腹腔注射PMSG(10 IU)。 2、 47~48小时后,每只小鼠腹腔注射HCG(0.8 IU),并与正常公鼠合笼;另取数只适龄母鼠(2月龄以上)作为受体,阴道口潮红,与结扎公鼠合笼。 3、第二天上午9:00前观察供体、受

反义RNA的制备实验

RNA 也可以由线状 DNA 为模板,通过 RNA 聚合酶(如T3、T7 或 SP6 ) 在体外合成。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编:郑晓飞。实验材料限制性内切核酸酶酶水解模板 DNA大肠杆菌 DNA 多聚酶胰 DNaseⅠ试剂、试剂盒氯仿苯酚乙醇DTTrNTP溶液转录缓冲液Tris-Cl盐

poly(A)+-RNA的制备实验

实验材料 RNA试剂、试剂盒 NaOH寡聚脱氧胸苷纤维素poly(A)样品缓冲液LiClEDTATE乙酸钠仪器、耗材 离心机分光光度计摇床实验步骤 1.  先用10 ml 5 mol/l NaOH清洗硅化的层析柱,然后用水冲洗。2.  取0.5 g oligo(dT)纤维素干粉加1 ml 0.1 m

血涂片的制备实验

实验材料 血液试剂、试剂盒 消毒酒精瑞特染色液蒸馏水仪器、耗材 载玻片盖玻片脱脂棉刺血针油镜用油显微镜实验步骤 一、血涂片的制备按以下各步骤进行操作。(一)采血采血之前先揉搓需要采血的部位,如耳垂或手指尖,使血流旺盛。用酒精消毒皮肤,待干。以左手拇指及食指夹持局部,再用消毒过的刺血针刺之,血液自然流

酪蛋白的制备实验

等电点沉淀法             实验方法原理 牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白,含量约为35 g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白的混合物,等电点为4.7。利用等电点时溶解度最低的原理,将牛

营养琼脂平板制备实验

实验方法原理用于纯化菌种,保存菌种。实验步骤成分:蛋白胨:                  10 g牛肉膏:                  5 g氯化钠:                  5 g琼脂:                    20 g蒸馏水:                 

磷酸酶制备实验

蛋白丝/苏氨酸磷酸酶,1型和2A型(PP-1和PP-2A)膜蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)实验材料细胞                                                          试剂、试剂盒缓冲盐清洗液                              

反义RNA的制备实验

实验材料 限制性内切核酸酶酶水解模板 DNA大肠杆菌 DNA 多聚酶胰 DNaseⅠ试剂、试剂盒 氯仿苯酚乙醇DTTrNTP溶液转录缓冲液Tris-Cl盐酸亚精胺NaCl胎盘RNase抑制物牛血清白蛋白RNA聚合酶DEPC仪器、耗材 DNA合成仪琼脂糖凝胶电泳微量离心管实验步骤 一、化学合成的 RN

营养琼脂平板制备实验

实验方法原理用于纯化菌种,保存菌种。实验步骤成分:蛋白胨:                  10 g牛肉膏:                  5 g氯化钠:                  5 g琼脂:                    20 g蒸馏水:                 

血涂片的制备实验

实验材料血液试剂、试剂盒消毒酒精瑞特染色液蒸馏水仪器、耗材载玻片盖玻片脱脂棉刺血针油镜用油显微镜实验步骤一、血涂片的制备按以下各步骤进行操作。(一)采血采血之前先揉搓需要采血的部位,如耳垂或手指尖,使血流旺盛。用酒精消毒皮肤,待干。以左手拇指及食指夹持局部,再用消毒过的刺血针刺之,血液自然流出。如血

金相试样的制备实验

  一、实验目的  1. 学会金相试样的制备方法。  2. 熟悉常用化学浸蚀试剂及其使用方法。  二、实验内容  按照金相试样的制备方法,每人制备出碳钢金相试样一块,用金相显微镜观察自己制备的试样,要求试样在显微镜下观察应没有磨痕、组织清晰。  三、实验原理  要对金属材料的显微组织进行观察,首先就

磷酸酶制备实验

实验材料 细胞试剂、试剂盒 缓冲盐清洗液抽提缓冲液实验步骤 一、组织/细胞制备和提取1. 配制下列溶液:(1) 缓冲盐清洗液:20 mmol/L 的 MOPS 缓冲液,pH 7.5(配成 100 ml)5 mmol/L 的 EDTA5 mmol/L 的 EGTA120 mmol/L 的 NaCl(2

PAGE胶制备方法实验

实验试剂1. 5x样品缓冲液(10ml):0.6ml 1mol/L的Tris-HCl(pH6.8),5ml 50%甘油,2ml 10%的SDS,0.5ml巯基乙醇,1ml 1%溴酚蓝,0.9ml蒸馏水。可在4℃保存数周,或在-20℃保存数月。2. 凝胶贮液:在通风橱中,称取丙烯酰胺30g,甲叉双丙烯

植物RNA的制备实验

酚/SDS法             实验材料 RNA 试剂、试剂盒

腺苷的实验制备方法

1、对照品溶液的制备精密称取腺苷对照品适量,加甲醇配制成1mL含40μg的对照品溶液。2、供试品溶液的制备取供试品20mL置100mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀超声处理5分钟,放置待沉淀完全,滤过,取许滤液50mL蒸干,残渣加水20mL溶解,以水饱和的正丁醇提取4次,合并正丁醇提取液蒸干,残渣加50

动物实验技术:转基因小鼠制备实验

1、 选取7~8周龄雌性小鼠,阴道口封闭,作为供体,下午3:00左右,每只小鼠腹腔注射PMSG(10 IU)。2、 47~48小时后,每只小鼠腹腔注射HCG(0.8 IU),并与正常公鼠合笼;另取数只适龄母鼠(2月龄以上)作为受体,阴道口潮红,与结扎公鼠合笼。3、第二天上午9:00前观察供体、受体,

细菌中制备基因组DNA实验——小量制备

真核生物的一切有核细胞(包括培养细胞)都能用来制备基因组 DNA。真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内,因此,制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离,又要保持DNA分子的完整。实验方法原理提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS(十二烷基硫酸钠)和蛋白酶K的溶液

质粒DNA的小量制备实验——煮沸小量制备法

实验方法原理当菌体在NaOH和 SDS溶液中裂解时,蛋白质与DNA发生变性,当加入中和液后,质粒DNA分子能够迅速复性,呈溶解状态,离心时留在上清中;蛋白质与染色体DNA不变性而呈絮状,离心时可沉淀下来。推荐采用本方案从1-24个菌落培养液中制备少量的质粒DNA,尽管该方案十分快捷,但制备的DNA的

质粒DNA的小量制备实验

实验方法原理 碱裂解法是最常用的小量制备质粒DNA的方法。实验材料 培养基试剂、试剂盒 EDTASDS乙醇VTE仪器、耗材 平板实验步骤 1.  接种一个单菌落于5 ml无菌LB培养液中,在37°C培养至饱和状态(过夜)。2.  取1.5 ml培养液以最大转速离心20 S。弃上清。3.  沉淀用10

转运反应成分的制备实验

试剂、试剂盒 APC 悬浮液HEPESNaClSMCC仪器、耗材 微量离心管Sephadex G50 脱盐柱实验步骤 1. 在一微量离心管中,4℃,10000 g 离心 APC 悬浮液 5~10 分钟,吸走上清。2. 用 0.1 mol/L HEPES(pH 7.4),0.1 mol/L NaCl

DNA-亲和介质的制备实验

试剂、试剂盒ATP[y-32P]ATPT4多核苷酸激酶乙酸铵乙醇酚 氯仿氯仿 异戊醇NaOAcT4 DNA连接酶酚异丙醇重蒸水Sepharose CL-2B溴化氰NN-二甲基甲酰胺NaOH磷酸钾KClCNBr-活化的Sepharose*.4BHClT4 多核苷酸激酶缓冲液TE接头-激酶缓冲液乙醇胺-

冰冻组织制备及切片实验

实验材料 冰冻组织试剂、试剂盒 异戊烷OCT多聚-L-赖氨酸仪器、耗材 滤纸切片机加热槽冰冻机细毛刷实验步骤 1.  将一个50 ml 硬质玻璃烧杯浸入盛有液氮的烧瓶(或敞口聚苯乙烯盒)中冰冻,烧杯中加CryoKwik(或异戊烷)。2.  在滤纸条一端以铅笔注明标签,用镊子将样品放于另一端。 3.