醋酸纤维素膜电泳分离鉴定蛋白质实验_电泳法
混合蛋白质样品中各种蛋白质的等电点不同, 在pH8 . 6 的巴比妥缓冲液中, 各种蛋白质所带的静电荷量不同, 加上蛋白质分子大小不相同, 在电场中移动的速度也不等, 例如, 血清或卵清样品中白蛋白等电点比其他蛋白质低, 在pH8 . 6 时带的负电荷比其他蛋白质多, 加上白蛋白的分子较小, 因此在电场中比其他蛋白质移动速度快。这样, 样品中的蛋白质在醋酸纤维素膜上就可以形成区带,实验方法原理混合蛋白质样品中各种蛋白质的等电点不同, 在pH8 . 6 的巴比妥缓冲液中, 各种蛋白质所带的静电荷量不同, 加上蛋白质分子大小不相同, 在电场中移动的速度也不等, 例如, 血清或卵清样品中白蛋白等电点比其他蛋白质低, 在pH8 . 6 时带的负电荷比其他蛋白质多, 加上白蛋白的分子较小, 因此在电场中比其他蛋白质移动速度快。这样, 样品中的蛋白质在醋酸纤维素膜上就可以形成区带, 可以分离和分析蛋白质组成等。另外, 作为纯化了的蛋白质电泳......阅读全文
蛋白质抽取实验
蛋白质在细菌中表现后，以反复的冷冻-解冻方法打破细胞，再用硫酸铵把蛋白质沉淀下来，此步骤可以去除大部份核酸、多醣、脂质等杂物。仪器用具：恒温震荡培养箱37℃；高速冷冻离心机及离心管 （使用20,000 rpm离心陀）使用高速离心机要注意： 离心机及离心陀的温度要预冷完全，相对位置的两只离心管要平衡好
蛋白质定量实验
试剂、试剂盒 考马斯亮蓝 G250乙醇磷酸实验步骤 (1) 准备 100~1500 ug/ml 的标准品, 溶于 Bradford 法相兼容缓冲液中。对于较稀的样品，可能通过增加样品在试剂体积中的比率而扩大灵敏度（microBradfordassay:1~25ug/mL)。如果样品与染料的比
蛋白质分离实验
分离未知 pI 蛋白质 分离已知pI 的蛋白质 实验方法原理 实验材料 含10
蛋白质合成实验
实验步骤材料无菌细胞培养，如 1X104～ 1X106 个细胞，24 孔板3H-亮氨酸。无血淸培养基中 2 MBq /ml (～50uCi/ml) (特异活性并不重要，因为它将由培养基中的亮氨酸浓度决定）非无菌SLS 或 SDS，1% (35m mol/L ) 溶于 0 .3 mol/L NaOH三
蛋白质回收实验
基本方案 实验材料 蛋白质 试剂、试剂盒
蛋白质定量实验
考马斯亮蓝蛋白质浓度分析法 碱性铜还原分析法 胺衍生法 实验方法原理 蛋白质分子中的芳香族氨基酸酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基，其化学结构中
蛋白质合成实验
实验步骤 材料 无菌 细胞培养，如 1X104～ 1X106 个细胞，24 孔板 3H-亮氨酸。无血淸培养基中 2 MBq /ml (～50uCi/ml) (特异活性并不重要，因为它将由培养基中的亮氨酸浓度决定） 非无菌 SLS 或
蛋白质回收实验
实验材料蛋白质试剂、试剂盒SDSDTT脱色液染色液仪器、耗材电泳仪透析膜实验步骤1. 凝胶浸泡在染色液中于室温缓慢摇动染色15~20 min，然后移至脱色液中于4℃温和摇动下脱色2~3 h。2. 切下染色后的凝胶条带，于4℃水中浸泡2~3 h，期间换几次水。然后分别将每条胶移入Petri培养皿中
蛋白质染色实验
实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 聚丙烯酰胺凝胶固定液染色液脱色液仪器、耗材 滤纸培养箱实验步骤 1. 将聚丙烯酰胺凝胶放在塑料容器并以3~5倍体积的固定液覆盖，在旋转摇床中缓慢揺动2 h。 2. 倾去固定液，以考马斯亮蓝染色液覆盖凝胶，并缓慢摇动4 h。3. 倾去染色液，用约50 ml 固定液冲
蛋白质染色实验
考马斯亮蓝染色 银染法 非氨盐银染法 快速银染法 实验方法原理 1. 凝胶中蛋白质的定位可用考马斯亮蓝染料染色或银染色。前者简便
蛋白质合成实验
实验步骤 材料 无菌 细胞培养，如 1X104～ 1X106 个细胞，24 孔板 3H-亮氨酸。无血淸培养基中 2 MBq /ml (～50uCi/ml) (特异活性并不重要
蛋白质分离实验
实验方法原理 实验材料 含10 mg蛋白质／ml 的溶于水的样品试剂、试剂盒 硼酸钠仪器、耗材 50 μm 内径的包被的融合硅毛细管柱CE 仪器实验步骤 1. 用 50 mmol/L 硼酸钠缓冲液 1/10（V/V） 稀释蛋白质样品，使终浓度 1.0 mg/ml，也可在 50 mmol/L 硼酸钠缓
蛋白质回收实验
实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 SDSDTT脱色液染色液仪器、耗材 电泳仪透析膜实验步骤 1. 凝胶浸泡在染色液中于室温缓慢摇动染色15~20 min，然后移至脱色液中于4℃温和摇动下脱色2~3 h。2. 切下染色后的凝胶条带，于4℃水中浸泡2~3 h，期间换几次水。然后分别将每条胶移入Petri
蛋白质合成实验
实验步骤 材料无菌细胞培养，如 1X104～ 1X106 个细胞，24 孔板3H-亮氨酸。无血淸培养基中 2 MBq /ml (～50uCi/ml) (特异活性并不重要，因为它将由培养基中的亮氨酸浓度决定）非无菌SLS 或 SDS，1% (35m mol/L ) 溶于 0 .3 mol/L NaOH
蛋白质分离实验_分离未知－pI－蛋白质
用 CE 进行 IEF分离是选择随后用于在非衍生毛细管柱上分离蛋白的缓冲液系统的有效的第一步。如果没有检测到蛋白质，可能是被吸收到柱的硅表面。在离子去垢剂如 SDS 存在的情况下重复分离过程，这样就会用负电荷包被蛋白质从而阻止吸收。但是，这意味着蛋白质只能依据大小的不同而进行分离。知道蛋白质的 pI
蛋白质定量实验步骤
(1) 准备 100~1500 ug/ml 的标准品, 溶于 Bradford 法相兼容缓冲液中。对于较稀的样品，可能通过增加样品在试剂体积中的比率而扩大灵敏度（microBradfordassay:1~25ug/mL)。如果样品与染料的比值太高, 可能会增加反应混合物的 PH 而导致反应背景较高
蛋白质的纯化实验
实验材料 Sephacryl S-300胶体试剂、试剂盒 缓冲液buffer A-150仪器、耗材 色析管柱铁夹试管铁架水平仪收集器浓缩用离心机 浓缩用离心管实验步骤 一、仪器设备色析管柱 （Pharmacia C column, 1.6×100 cm）、铁架、铁夹及水平仪；部分收集器（frac
蛋白质印迹实验
试剂、试剂盒 甘氨酸TrisSDS甲醇实验步骤 1. 溶液配置(1) 连续缓冲系统甘氨酸 39 mmol/L；Tris 48 mmol/L；SDS 0.0375% ( W/V)；甲醇 20% (V/V)。溶液均需用双蒸水配置。这个缓冲系统可用作阳极缓冲液，也可用作阴极缓冲液。(2) 不连续缓冲系统阳
蛋白质的纯化实验
胶体过滤法 实验材料 Sephacryl S-300胶体 试剂、试剂盒
蛋白质的纯化实验
不发生电泳现象，蛋白质粒子带负电荷，在电场中向负极移动，蛋白质粒子带正电荷；在等电点偏碱性溶液中，在电场中向正极移动，可以将蛋白质进行分离纯化。这种现象称为蛋白质电泳(Electrophoresis).蛋白质的分离纯化的一般原则①高回收率②高纯度③高活性④方便与快捷⑤经济蛋白质的分离纯化的一般步骤①
蛋白质含量测定实验
folin—酚试剂法 考马斯亮蓝法 实验方法原理 这种蛋白质测定法是最灵敏的方法之一。过去此法是应用最广泛的一种方法，由于其试剂乙的配制较为困难（
蛋白质浓度分析实验
BRADFORD分析（BIORAD)BCA分析(PIERCE)三氯乙醇沉淀实验材料标准蛋白质 试剂、试剂盒BSA
蛋白质含量测定实验
Bradford法 实验材料 蛋白质 试剂、试剂盒
蛋白质的分离实验
实验方法原理 凡盐析所获得的粗制蛋白质（盐析得到的IgG）中均含有硫酸铵等盐类，这类将影响以后的纯化，所以纯化前均应除去，此过程称为“脱盐”（desalthing）。脱盐常用透析法和凝胶过滤法，这两种方法各有利弊。前者的优点是透析后析品终体积较小，但所需时间较长，且盐不易除尽；凝胶过滤法则能将盐除尽
蛋白质纯度测定实验
实验步骤在评价样品纯度之前，首先需要鉴定待测杂质的类型，如核酸、碳水化合物、脂质、无关蛋白质、同工酶类、失活蛋白质，进而确定在特定溶液条件中, 能够区分假定杂质和目标蛋白质的理化特性 (化学分析或物理特征）。而纯度则是指待测杂质含量低于某个特定水平。需要注意的是，上述说明中并没有要求描述杂质的性质。
蛋白质的分离实验
凝胶层析法 IEF（等电点聚焦电泳）法 实验方法原理 凡盐析所获得的粗制蛋白质（盐析得到的IgG）中均含有硫酸铵等盐类，这类将影响以后的纯化，所以纯
蛋白质浓度分析实验
BRADFORD分析（BIORAD) BCA分析(PIERCE) 三氯乙醇沉淀 实验材料 标准蛋白质
蛋白质纯度测定实验
蛋白质纯度测定实验 实验步骤 在评价样品纯度之前，首先需要鉴定待测杂质的类型，如核酸、碳水化合物、脂
蛋白质含量测定实验
实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 牛血清NaCl考马斯亮蓝仪器、耗材 分光光度计离心机实验步骤 分别在两组微量离心管中各加入0.5 mg/ml 牛血清白蛋白，以 0.15 mmol/l NaCl补足至100 μl，同时以两管100 μl 的0.15 mmol/l NaCl作空白对照。2. 每管各加
蛋白质印迹实验
从SDS凝胶上转移蛋白质 从琼脂糖凝胶上转移蛋白质 从等电聚焦凝胶上转移蛋白 检测 试剂、试剂盒