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实验步骤：（1）诱导靶蛋白表达分别挑取对照菌和重组菌1~2个菌落，接入5ml含Amp（30μg/ml）的LB培养液，37℃振荡培养过夜。取5ml过夜培养物接入500ml含Amp（30μg/ml）的LB培养液，37℃振荡培养2h以上，至对数中期（A550=0.5~1.0）。向诱导管中加入IPTG使其浓度达到1mmol/L，28℃振荡培养5h左右取样。（2）目的蛋白质的分离纯化样品处理① 取500ml诱导的培养液，12000rpm离心5min，弃上清，收集菌体。菌体在-20℃（最好在用液氮或干冰）反复冻融几次，使菌体裂解后呈现黏液状。② 用针筒将20ml含0.2% Triton X-100和1mmol/L PMSF的PBS强行注入黏的细胞裂解液中，剧烈混匀。加入DNase和RNase至终浓度达5µg/ml，4℃振荡温育10min，4℃ 8000RPM离心出去不溶物，上清液转移至一新管中，加β-巯基乙醇（或DTT）至终浓度为1......阅读全文
Gateway克隆技术-BP反应构建入门载体与LR反应构建表达载体的区别 提到克隆、重组载体，就想到5字金言：分、切、连、转、筛，“分”是指分离制备合格的待操作的DNA；“切”是指用序列特异的限制性内切酶切开载体DNA，或者切出目的基因；“连”
Gateway技术提供以下可能： 通过去除冗长的亚克隆步骤节省您的时间 同时将您的基因转移到多个表达系统 在任何您选择的系统――体外，细菌，酵母，昆虫，或哺乳动物――分析表达一、一种更好的克隆方法Gateway技术能够克隆一个或多个基因进入到任何蛋白表达系统（图1）。这项强大的体
原核表达系统是常被用来研究基因功能的成熟系统，由于原核表达系统具有包涵体蛋白不易纯化、蛋白修饰不完整等缺陷，人们也开始利用真核细胞表达系统来研究基因。自上世纪70年代基因工程 技术诞生以来，基因表达技术已渗透到生命科学研究的各个领域。并随着人类基因组计划实施的进行，在技术方法上得到了很大发展，时至今
实验材料 宿主细胞 质粒或λ噬菌体表达载体 包装提取物 电转化感受态大肠杆菌
类似方案 1、方案 2 描述了在真核表达载体上进行 cDNA 文库构建与筛选的方法, 流程分为以下两个阶段：1. 在真核表达载体上构建 cDNA 文库；2. 在真核表达载体上构建的 cDNA 文库的筛选。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）上册，作者：黄培堂。实验材料宿主细胞质粒或λ噬菌体表达载体
实验材料 宿主细胞质粒或λ噬菌体表达载体包装提取物电转化感受态大肠杆菌试剂、试剂盒 限制性内切核酸酶缓冲液限制性内切核酸酶通过 poly(A)+富集的 mRNAcDNA 文库含适当抗生素的 Terrific 球脂平板含适当抗生素的 Terrific 肉汤培养基仪器、耗材 cDNA 合成试剂盒实验步骤
细菌表达系统有各种各样的载体和宿主菌可供选择，大部分工程菌的增殖时间短, 不仅便于快速评价实验结果，而且降低了技术和设备无菌要求的严格性。经过简单的调整, 许多在实验室规模下具有的这些内在优点在大规模的自动生产过程中也具有 。实验步骤一、使用大肠杆菌生产外源蛋白有越来越多的细菌表达系统可用于外源蛋白
实验方法原理 实验步骤 一、使用大肠杆菌生产外源蛋白 有越来越多的细菌表达系统可用于外源蛋白的生产。影
基因载体是基因工程的核心，也是基因治疗中强有力的生物工具，我们先来认识和阅读载体图谱吧。 一、载体分类及载体组成元件 载体分类 1、按属性分类：病毒载体和非病毒载体 病毒载体是一种常见的分子生物学工具，可将遗传物质带入细胞，原理是利用病毒具有传送其基因组进入目的细
基因载体是基因工程的核心，也是基因治疗中强有力的生物工具，我们先来认识和阅读载体图谱吧。 一、载体分类及载体组成元件 载体分类 1、按属性分类：病毒载体和非病毒载体 病毒载体是一种常见的分子生物学工具，可将遗传物质带入细胞，原理是利用病毒具有传送其基因组进入目
与PCR、qPCR等技术一样，作为分子实验室必备手段，分子克隆技术被广泛用于多样的基因功能研究。所谓分子克隆指的是在体外将核酸分子插入病毒、质粒或其他载体分子，构成遗传物质的新组合，使之进入宿主细胞内并获得持续稳定增殖能力和表达。 基因克隆技术的发展经历3个阶段，第一阶段为经典的T4 DN
基因载体是基因工程的核心，也是基因治疗中强有力的生物工具，我们先来认识和阅读载体图谱吧。 载体分类及载体组成元件 载体分类 1、按属性分类：病毒载体和非病毒载体 病毒载体是一种常见的分子生物学工具，可将遗传物质带入细胞，原理是利用病毒具有传送其基因组进入目的细胞，进行感染的分子机制。
经常提质粒吗？熟练之后，提质粒乃至质粒构建都很简单。但如果真问起一些质粒的细节，可能很多人回答不了。不信随我看看。 质粒组成要素 一个合格的质粒含有以下组成部分： 复制起始位点 Ori 即控制复制起始的位点。原核生物 DNA 分子中只有一个复制起始点。而真核生物 DNA 分子有多个复制起始位点。
人类 sgRNA 文库相关产品 货号 文库 sgRNA 数目 基因数目 管数 载体 L01-LS03 Innate kinases & ubiquitin ligases 475
载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。一、一个合格质粒的组成要素 复制起始位点Ori 即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。 抗生素抗性基因 可以便于加以
载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。一、一个合格质粒的组成要素 复制起始位点Ori 即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。 抗生素抗性基因 可以便于加以
载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。一、一个合格质粒的组成要素 复制起始位点Ori 即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。 抗生素抗性基因 可以便于加以
实验材料：异丙基-β-D-硫代半乳糖苷试剂、试剂盒：PP 缓冲液
实验材料 异丙基-β-D-硫代半乳糖苷试剂、试剂盒 PP 缓冲液变性裂解缓冲液仪器、耗材 微量滴定板实验步骤 3.1 高通量蛋白的表达和纯化我们用在 PQE30 表达载体里构建的，可表达带 N 端 RGS-His6 标记的大肠杆菌 cDNA 表达克隆来生产重组植物蛋白。由于超出本章节的范围，
二、 相关产品 看到这里，相信大家对cDNA克隆和ORF克隆有了一定的了解，那接下来就来聊聊相关的产品吧！ 1.全长cDNA克隆产品 cDNA克隆（长度是指编码区） FL / MFL开头的cDNA克隆现在基本不销售
实验方法原理 大肠杆菌中异源性的 RNA-BP 与靶 RNA 的结合会抑制靶基因的翻译。此方法已成功地应用于包括 HIV Rcv 蛋白和核仁素（nucleolin）在内的多种 RNA
实验方法原理 大肠杆菌中异源性的 RNA-BP 与靶 RNA 的结合会抑制靶基因的翻译。此方法已成功地应用于包括 HIV Rcv 蛋白和核仁素（nucleolin）在内的多种 RNA-BP 的研究中。实验材料 质粒菌株试剂、试剂盒 X-Gal 储液IPTG 储存液lacZ 缓冲液ONPG 溶液碳酸钠
实验方法原理大肠杆菌中异源性的 RNA-BP 与靶 RNA 的结合会抑制靶基因的翻译。此方法已成功地应用于包括 HIV Rcv 蛋白和核仁素（nucleolin）在内的多种 RNA-BP 的研究中。实验材料质粒菌株试剂、试剂盒X-Gal 储液IPTG 储存液lacZ 缓冲液ONPG 溶液碳酸钠溶液β
实验材料异丙基-β-D-硫代半乳糖苷试剂、试剂盒PP 缓冲液变性裂解缓冲液仪器、耗材微量滴定板实验步骤3.1 高通量蛋白的表达和纯化我们用在 PQE30 表达载体里构建的，可表达带 N 端 RGS-His6 标记的大肠杆菌 cDNA 表达克隆来生产重组植物蛋白。由于超出本章节的范围，我们不
2.包涵体的分离与纯化细胞破碎时提取细胞内产物的关键。对于细菌的裂解常用的有酶溶法、超声破碎法、化学渗透法、玻璃珠研磨等。包涵体可通过超声波、匀浆等常规的方法是菌体破碎后，离心就可得到。密度梯度离心后可得到高纯度的包涵体。包涵体一般不溶于水，为了获得可溶性的蛋白质可加入强蛋白质变性剂后使其溶解。一般
二、慢病毒载体 慢病毒载体（Lentivirus）是一类改造自人免疫缺陷病毒（HIV）的病毒载体，是逆转录病毒的一种，基因组是RNA，其毒性基因已经被剔除并被外源性目的基因所取代，属于假型病毒
进行抗体开发和研究，不管是完整的单克隆抗体分子还是Fab、scFv，我们需要了解抗体分子的表达量、亲和力、反应动力学（特别是解离速率koff）以及抗体的其它特性如亚型、特异性等等。使用传统的ELISA方法筛选抗体，通常只能先看哪些克隆有表达，然后把表达水平较高的克隆挑出来进一步研究。这种方法筛选抗体
单拷贝克隆产量低，高拷贝克隆稳定性差，一直让研究者在克隆 表达时难以选择。蛋白的表达就有诱导表达系统，可以实现人为地控制蛋白的表达时间和表达量——现在连质粒的拷贝数可以借助诱导的方法来人为控制了！Epicentre的专利技术——CopyControl克隆 系统能够让您共享单拷贝和高拷贝的
Gateway技术提供以下可能： 通过去除冗长的亚克隆步骤节省您的时间 同时将您的基因转移到多个表达系统 在任何您选择的系统――体外，细菌，酵母，昆虫，或哺乳动物――分析表达 一、一种更好的克隆方法 Gateway技术能够克隆一个或多个基因进入到任何蛋白表达系统（图1）。这项强大的体外技术大大
表达载体的构建是生物技术和所需蛋白质产生的基本工具，本文总结了pET-32α（+）载体技术的构建，该技术通常用于研究实验室。该方法包括获得用于构建载体的外源DNA片段，将DNA片段亚克隆到pET-32α（+）表达载体中，在大肠杆菌 BL21（DE3）中进行蛋白质表达以及在大肠杆菌中在天然条件下进