数字PCR在造血干细胞移植后嵌合状态检测的应用
背景导读—何为嵌合状态的检测？骨髓和外周血干细胞移植是许多恶性和非恶性疾病的有效治疗方法。造血干细胞移植后，受体产生新的血细胞，这些血细胞在遗传上来自于供体DNA。确认新的造血系统来源于供体是临床复发监测的重要组成部分。一般采用血细胞基因型检测的方式，称为嵌合体分析。完全供体细胞嵌合状态意味着100%的血细胞来自供体，而混合或部分嵌合意味着受体细胞也存在。因此检测时需要分析受体在移植后的血液或骨髓中供体和受体的基因型的各自比例。法国苏黎世输血服务中心实验室使用Stilla Technologies的Naica™ Crystal数字PCR系统进行双等位基因单核苷酸变异（SNV）检测，从而确定嵌合体状态。嵌合体检测的两步策略移植前：要想得到正确的移植后的检测结果,必须选择合适的标记物，苏黎世输血服务中心实验室建立了一个由24种特定SNV分析组成的组合，用于寻找在单个样品分析中筛选供体和受体DNA的合适标记。移植后：在临床上，嵌合体监......阅读全文
数字PCR技术
数字PCR作为第三代PCR技术，它是将分子生物学与现代微机电、微纳制造等工程技术相结合的典范。数字PCR以聚合酶链式反应的理论和技术体系为基础，结合现代微机电和光学检测技术，实现单分子水平的核酸精确定量检测。数字PCR的核心思想是将核酸样品平行划分为大规模单分子水平的微反应单元，然后对众多微反应单元
数字PCR简介
1985年美国科学家Kary Mullis发明PCR方法以后，PCR已经成为生命科学研究领域中最常规的实验方法之一。PCR是用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，可看作是生物体外的特殊DNA复制。PCR的最大特点，是能将微量DNA大量扩增。最传统的一代PCR采用琼脂糖电泳的方式对PCR产物进
什么是数字PCR
数字PCR技术是一种核酸分子绝对定量技术，其原理是将一个PCR反应体系分配到大量微小的反应单元中，在每个单元包含一个或多个拷贝的目标分子( DNA 模板) ，进行单分子模板扩增，扩增结束后通过阳性反应的数目和统计学方法计算原始样本中目标基因的拷贝数。
数字PCR发展历程
传统的荧光定量PCR，经过多年的发展，已是很成熟的实验方案了。其中，最常用的是Taqman法和SYBR Green法。而在这二种方法当中，Taqman法又以其特异性高、定量精确，得到广大用户的认可。但是Taqman法PCR，它还是一个相对定量的办法。它测的是一个Ct值，也就是PCR到第几个循
数字PCR的原理
数字 PCR 的工作原理在于将 DNA 或 cDNA 样品分割为许多单独、平行的 PCR 反应，部分这些反应包含了靶标分子（阳性），而其他不包含（阴性）。 单个分子可以被扩增一百万倍或更多。 在扩增期间，TaqMan® 化学试剂及染料标记探针可用于检测特定序列的靶标。 当不存在任何靶标序列时，没有信
数字PCR应用（一）
一． PCR的发展历史 PCR技术自问世以来，在遗传病、病原体、癌基因等分子诊断领域和法医鉴定等方面发挥了巨大作用。第一代 PCR在进行扩增后通过凝胶电泳进行定性分析。 随着生物分子荧光技术的发展，1992年实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR, qPCR) 应运
数字PCR应用（三）
Fluidigm公司于2006年底推出了基于集成流体通路（IFC）芯片的Bio-Mark™ 高通量基因剖析系统。 其创新在于集成液体通路技术：应用集成电路制造工艺（光刻）在硅片或石英玻璃上刻上许多微管和微腔体，经过不同的控制阀门控制溶液在其中的活动来完成生物样品的分液、混合、PCR扩增。图8. Bi
数字PCR的原理
数字 PCR 的工作原理在于将 DNA 或 cDNA 样品分割为许多单独、平行的 PCR 反应，部分这些反应包含了靶标分子（阳性），而其他不包含（阴性）。 单个分子可以被扩增一百万倍或更多。 在扩增期间，TaqMan® 化学试剂及染料标记探针可用于检测特定序列的靶标。 当不存在任何靶标序列时，没有信
数字PCR的优势
数字PCR是生命科学领域最引人瞩目的创新之一。与其他传统分子诊断技术相比，数字PCR技术的优势在于: 高灵敏度，可实现单分子级检测dPCR本质上将一个传统的PCR反应变成了数万个PCR反应， 在这数万个反应单元中分别独立检测目的序列，从而大大提高了检测的灵敏度。 高精度，可检测微
什么是数字PCR
数字PCR即Digital PCR（dPCR)，它是一种核酸分子绝对定量技术。相较于qPCR，数字PCR可让你能够直接数出DNA分子的个数，是对起始样品的绝对定量。PCR实际上是一个在模板DNA、引物(模板片段两端的已知序列)和四种脱氧核苷酸等存在的情况下，DNA聚合酶依赖的酶促合成反应，扩增的特异
什么是数字PCR？
数字PCR技术也称为第三代PCR技术，是一种核酸高灵敏检测和绝对定量的新方法。同传统的PCR相比，数字PCR增加了对反应体系进行分隔（Partition）的操作，将几十微升的反应体系分隔成了数万微小独立反应体系，核酸模板在这种分隔过程中被充分稀释，理想状态下每个微滴中含有1个分子的核酸模板，扩增完
数字PCR应用（二）
4、能够有效区分浓度差异（变化）微小的样品：更好的准确度、精密度和重复性，可以用于精确测定靶基因的相对表达，基因拷贝数变异分析等。图4. qPCR和dPCR的对比 四．dPCR的多指标检测的实现 如同qPCR一样，dPCR中实现多指标的并行检测能显著降低检测成本，获取更丰富的检测信息。 不同于qPC
数字PCR应用及前景
一． PCR的发展历史 PCR技术自问世以来，在遗传病、病原体、癌基因等分子诊断领域和法医鉴定等方面发挥了巨大作用。第一代 PCR在进行扩增后通过凝胶电泳进行定性分析。 随着生物分子荧光技术的发展，1992年实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR, qPCR) 应运
数字PCR的前生今世
近年来，数字PCR已取得了很大的进展，这在很大程度上要归因于商业化系统的开发，如QX200。这些技术进步似乎预示着一个转折点，更多的研究人员很快将能使用这种技术。这将推动新应用的开发，挖掘出数字PCR的全部潜能，并让科学家转向更强大的生物标志物研究，甚至单细胞分析。 2月底，Bi
数字PCR技术的原理
PCR实际上是一个在模板DNA、引物(模板片段两端的已知序列)和四种脱氧核苷酸等存在的情况下，DNA聚合酶依赖的酶促合成反应，扩增的特异性取决于引物与模板DNA的特异结合。
数字PCR检测技术介绍
数字PCR（Digital PCR-dPCR）技术是一种新的核酸检测和定量方法，又称单分子PCR，它的原理是将一个标准PCR反应分配到大量微小的反应器中，在每个反应器中包含或不包含一个或多个拷贝的目标分子( DNA模板) ，实现“单分子模板PCR扩增”。 扩增结束后，通过阳性反应器的数目“数出”目标
数字PCR技术的优势
1.绝对的定量：不依赖于标准曲线和参照样本，直接检测目标序列的拷贝数。 2.高灵敏度检测：灵敏度高达0.01%，可以检测含量极低的核酸序列（如CTDNA）。 3.区分浓度差异微小的样品：可以精准测定靶基因相对表达，基因拷贝数变异等。
数字PCR的研究历史
1983年由美国Mullis首先提出设想，1985年发明了聚合酶链反应，即简易DNA扩增法，标志着PCR技术的真正诞生。1999 年，美国学者 Kenneth Kinzler 与 Bert Vogelstein 首次提出了数字 PCR (digital PCR，dPCR)的概念，实现了核酸拷贝数绝对
数字PCR技术进展简介
聚合酶链式反应 ( polymerase chain reaction，PCR) 提出至今已有20年时间，期间PCR已发展成为分子生物学领域的一项关键技术和常规技术，极大地推动了生命科学各个领域的发展。特别是 90 年代后期，美国 ABI 公司推出的实时荧光定量PCR( real time PCR，
数字PCR应用及前景
剖析|你想要知道的数字PCR应用及前景 一． PCR的发展历史 PCR技术自问世以来，在遗传病、病原体、癌基因等分子诊断领域和法医鉴定等方面发挥了巨大作用。代 PCR在进行扩增后通过凝胶电泳进行定性分析。 随着生物分子荧光技术的发展，1992年实时荧光定量PCR(Quantitative Real
达普生物最新自动数字PCR系统，开拓数字PCR多重检测能力
前言：2022 年 8 月，达普生物科技有限公司正式推出六色荧光通道的微液滴式数字 PCR——星云六色全自动数字 PCR 系统（Nebula 6 Channel Auto dPCR System）。该系统基于液滴微流控技术，整合高功率长寿命光学系统，超灵敏荧光检测技术及全新的 AI 图像分析算法为一
一文知晓PCR，定量PCR，数字PCR方法选择
从1985年至今的30多年时间里，PCR分析经历了三代技术的发展。diyi代传统PCR技术，采用琼脂糖凝胶电泳的方法对PCR产物进行定性分析。第二代荧光定量PCR技术，通过在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的积累实时监控PCR进程，最后用Cq值对基因进行定量分析。第三代数字PCR技术，通过
RainDrop数字PCR系统实现10重PCR分析
【摘要】美国RainDance Technologies公司拥有ZL的RainStorm即皮升级微流体液滴制备技术，基于此核心技术RainDance推出了新型RainDrop 数字PCR系统，这一新型系统除具有超高检测灵敏度和精确绝对定量能力外，更拥有无与伦比的多重分析能力，可实现10重PCR分
快速了解荧光定量PCR与数字PCR区别
提起 PCR，在生物及其相关行业内可谓如雷贯耳，无人不知无人不晓，其影响之深，应用之广可见一斑。 1985 年，美国 PE-Cetus 公司的 Mullis 等人发明了聚合酶链反应（PCR），实现了在试管中模拟细胞内的 DNA 复制。然而，采用 E-coli DNA 聚合酶进行 PCR，由
血浆中ctDNA甲基化数字PCR检测攻略Naica数字PCR的应用
基因调控区的DNA甲基化状态的改变可导致多种癌症的发生。这种表观遗传学改变在生物学上是稳定的，并存在于循环肿瘤DNA（ctDNA）中，使其适合于早期检测和无创动态监测肿瘤负荷。数字PCR技术凭借其较高的灵敏度、精准度以及对抑制剂的耐受度，在对低拷贝样品检测时表现出了极大的优势。在转移性和II/III
数字PCR技术的应用举例
EGFR突变的肺癌治疗过程中 的液体活检检测是一个非常具有挑战性的工作 ，但这个基因在亚洲人群的高突变频率使非常多的肺癌患者在接受对应靶向药中受益（约30%）。数字PCR可以以肺癌患者的血浆中游离肿瘤DNA（CTDNA）为样品，检测EGFR敏感性和药物抗性相关的突变。 运用数字PCR为精准
数字pcr用不起来的原因
因为模板质量问题。1）模板提取不完整，其中不含你的目的基因，或目的基因含量太低。可以跑个电泳看看提取的DNA，PCR阳性样品与阴性样品是否有明显差别。如果确定是这种问题，可以增加模板量试试，但不一定行得通。2）模板里面残留某种试剂成份，可能抑制Taq聚合酶的活性，如果是这种情况，可以用试剂盒把模板再
数字PCR的原理是什么
数字PCR即Digital PCR（dPCR)，它是一种核酸分子绝对定量技术。相较于qPCR，数字PCR可让你能够直接数出DNA分子的个数，是对起始样品的绝对定量。 在定量PCR时，我们常常纠结一个问题，究竟是相对定量还是绝对定量呢？如今，你无需纠结了，因为数字PCR（digital PCR）
多重数字PCR技术介绍
什么是数字PCR？数字PCR是一种新的绝对定量PCR，通过对PCR反应物进行有限稀释，随后在不同的反应腔室里进行PCR扩增，最后根据泊松分布原理及阳性微滴的个数与比例得出靶分子的起始拷贝数或浓度的技术。什么是多重PCR？多重PCR又称多重引物PCR或复合PCR，它是在同一PCR反应体系里加上两对以上
普通－PCR、实时荧光定量－PCR－和数字－PCR－对比分析
提起 PCR，在生物及其相关行业内可谓如雷贯耳，无人不知无人不晓，其影响之深，应用之广可见一斑。 1985 年，美国 PE-Cetus 公司的 Mullis 等人发明了聚合酶链反应（PCR），实现了在试管中模拟细胞内的 DNA 复制。然而，采用 E-coli DNA 聚合酶进行 PCR，由于