大规模制备和浓缩反转录病毒原液实验
对于某些用途来说（如体内感染细胞），有必要浓缩反转染病毒原液以增加其滴度。如果想要用不编码可选择标记的病毒感染一群细胞，必须用髙滴度的病毒。操作中需用几百毫升至几升的产毒细胞上清。聚乙二醇相沉淀及层析法浓缩病毒实验材料病毒试剂、试剂盒PEGNTE仪器、耗材转子离心机实验步骤1. 制备病毒原液。加5 mol/l NaCl至病毒原液中，4℃不断搅拌，至终浓度达到0.4 mol/l。2. 缓慢加入PEG 6000至终浓度8.5%，4℃持续搅拌1~1.5 h。 3. 7000 g 离心10 min，用原病毒体积1%的NTE缓冲液溶解沉淀。直接使用或贮存于-70 ℃或-80℃。 4. 准备好Sepharose CL-4B或CL-2B柱子，用NTE缓冲液平衡。对于来自100 ml 病毒原液的沉淀用10 ml Ecomo-柱。5. 加病毒，用NTE缓冲液以1 ml......阅读全文
大规模制备和浓缩反转录病毒原液实验
离心法 聚乙二醇相沉淀及层析法浓缩病毒 实验材料 病毒细胞 试剂
大规模制备和浓缩反转录病毒原液实验
对于某些用途来说（如体内感染细胞），有必要浓缩反转染病毒原液以增加其滴度。如果想要用不编码可选择标记的病毒感染一群细胞，必须用髙滴度的病毒。操作中需用几百毫升至几升的产毒细胞上清。聚乙二醇相沉淀及层析法浓缩病毒实验材料病毒试剂、试剂盒PEGNTE仪器、耗材转子离心机实验步骤1. 制备病毒原液。加5
大规模制备和浓缩反转录病毒原液实验
实验材料 病毒细胞试剂、试剂盒 小牛血清仪器、耗材 滤器转子实验步骤 1. 将产病毒细胞按1：10或1：20从刚生长汇片的细胞分传至20~50个10 cm 培养皿中，培养细胞至50%~90%汇片。2. 弃去培养液，轻轻加入半量的培养液，注意培养液碱性不要过大，培养2~3天。 3. 收取上清，用
大规模制备和浓缩反转录病毒原液实验——离心法
对于某些用途来说（如体内感染细胞），有必要浓缩反转染病毒原液以增加其滴度。如果想要用不编码可选择标记的病毒感染一群细胞，必须用髙滴度的病毒。操作中需用几百毫升至几升的产毒细胞上清。实验材料病毒细胞试剂、试剂盒小牛血清仪器、耗材滤器转子实验步骤1. 将产病毒细胞按1：10或1：20从刚生长汇片的细胞
反转录病毒原液检测实验
实验材料 病毒细胞试剂、试剂盒 polybrene小牛血清DMEM仪器、耗材 培养皿滤膜实验步骤 1. 在开始分析的前1天，按1：50将NIH 3T3细胞分传于3个6 cm 培养皿中。将1个培养皿标记为阳性对照，1个为阴性对照，1个用于待测病毒原液。2. 含有选择标记的待测病毒的制备：加0.01
反转录病毒原液检测实验
辅助病毒是一种有时存在于无复制能力病毒原液中的有复制能力的病毒，辅助病毒的存在在动物的感染及谱系分析中会成为问题。实验材料病毒细胞试剂、试剂盒polybrene小牛血清DMEM仪器、耗材培养皿滤膜实验步骤1. 在开始分析的前1天，按1：50将NIH 3T3细胞分传于3个6 cm 培养皿中。将1个培
反转录病毒原液检测实验
实验材料 病毒细胞 试剂、试剂盒 polybrene 小牛血清 DMEM
反转录病毒原液检测实验——反转录酶分析法
实验材料病毒试剂、试剂盒SSC乙醇仪器、耗材滴定板滤纸离心机实验步骤1. 加50 μl RT反应混合物于96-孔微量滴定板的各孔中。每个待测或对照样品占一孔。加10 μl 病毒上淸，盖上平板，置于37℃培养箱中温育1~2 h。2. 将各反应液10 μl 点于一张2.5 cm 直径的圆形DE52或
反转录病毒载体的制备实验
实验材料二个反转录病毒包装细胞株反转录病毒载体包含选择性标记试剂、试剂盒PBS细胞染色液组织培养皿仪器、耗材完全的 Dulbecco 改良 Eagle 培养基低蛋白质结合的纤维素乙酸盐注射器式滤器克隆形成环实验步骤展开
反转录病毒原液检测实验——在TrisTricine缓冲系统中电泳
实验材料蛋白质试剂、试剂盒Tricine样品缓冲液考马斯亮蓝染色液乙酸仪器、耗材电泳仪离心机实验步骤1. 按“Laemmli凝胶电泳法”的步骤1~7，配制溶液并灌制分离胶和积层胶。 2. 制备样品，但采用2×Tricine的样品缓冲液，加样前样品于40℃处理30〜60 -11。多肽分子量标准混合
假包膜型反转录病毒载体的制备实验
实验材料反转录病毒载体质粒试剂、试剂盒293GP 和 NIH3T3 细胞的培养物仪器、耗材超速离心机细胞培养皿聚丙烯管灭菌无热原的注射器式滤器超干净的离心管宽嘴离心瓶超速离心机G S A 转子实验步骤展开
慢病毒怎么纯化和浓缩
慢病毒浓缩后沉淀用多少体积1%bsa重悬慢病毒浓缩后沉淀用多少体积1%bsa重悬慢病毒浓缩后沉淀用多少体积1%bsa重悬
MVA－病毒储液制备实验
基本方案 免疫染色法滴度测定 实验方法原理 实验材料 成片 CEF 或 BHK-
MVA－病毒储液制备实验
实验方法原理 实验材料 成片 CEF 或 BHK-21 细胞改造的痘苗病毒试剂、试剂盒 MEM-10 和 MEM-2.5 完全培养基仪器、耗材 150 cm2 组织培养瓶CO2培养箱Sorvall 离心机250 ml 无菌离心瓶实验步骤 1. 用 1.5 ml 胰酶/EDTA 加 8.5 ml
MVA－病毒储液制备实验
实验材料成片 CEF 或 BHK-21 细胞改造的痘苗病毒试剂、试剂盒MEM-10 和 MEM-2.5 完全培养基仪器、耗材150 cm2 组织培养瓶CO2培养箱Sorvall 离心机250 ml 无菌离心瓶实验步骤1. 用 1.5 ml 胰酶/EDTA 加 8.5 ml 的维持培养基消化 7 瓶
杆状病毒储液制备实验
基本方案 从悬浮培养中制备 基本方案 从单层培养中制备 噬斑试验测定滴度 实验方法原理 实验材料
杆状病毒储液制备实验
实验方法原理 实验材料 悬浮培养的 Sf 9 细胞待接种的杆状病毒（野生型的或重组）试剂、试剂盒 含10％胎牛血清的昆虫细胞培养液 TNM-FH仪器、耗材 150 mm 培养瓶 27℃ 培养箱 倒置显微镜 带有 GH-3.7 水平转子的4℃GPR离心机 带螺口盖的冻存管 液氮罐 500 ml 旋转细
病毒透射电镜病毒标本制备实验4
直接取材镜检法实验材料病毒试剂、试剂盒磷钨酸仪器、耗材透射电镜实验步骤为了进行天花、水痘、疱疹等病毒的临床快速诊断，可用毛细吸管直接刺入病人皮肤疱疹内吸取少量泡液，立即滴于有膜的铜网上，稍干后即用 1%-2% 的磷钨酸溶液进行负染，待干后立即用电镜观察。于电镜下常可于短时间内发现典型的病毒颗粒。注意
病毒透射电镜病毒标本制备实验1
悬滴标本法实验方法原理病毒等微小颗粒标本可取其培养物经稀释或分离提纯后直接滴于附有支持膜的载网上用电镜观察。实验材料病毒试剂、试剂盒稀释液仪器、耗材透射电镜实验步骤悬液应尽量除去杂质如培养基残渣，细胞碎片、糖类及各种盐类的结晶等，这些杂质的存在会干扰染色及电镜观察。用该法的缺点是由于电子穿透能力很弱
病毒透射电镜病毒标本制备实验3
免疫吸附法实验方法原理有时由于病毒量少，用普通悬滴法在电镜下难以发现稀少散在的病毒粒子，则可用免疫吸附电镜法。主要是利用相应的病毒抗血清来吸附病毒，用本法检测病毒，快速、灵敏、特异性强，是可靠的电镜病毒诊断技术之一，也可用于病毒快速诊断。实验材料病毒试剂、试剂盒磷钨酸仪器、耗材透射电镜实验步骤将抗病
病毒透射电镜病毒标本制备实验2
实验方法原理病毒研究中用磷钨酸染色后发现在黑色背景中病毒粒子如同一个亮晶晶的「空洞」。尔后用磷钨酸对飞噬菌体染色也见到同样的现象，即将这种现象称为「负染色」。负染色是一种反衬染色，即高密度物质如重金属磷钨酸、醋酸铀等在透射电镜下形成黑色的背景反衬低密度的标本如病毒为白色透亮，从而清楚地显示出被衬物的
病毒免疫荧光实验_病毒染色标本的制备
实验材料待检测病毒试剂、试剂盒丙酮0. 01mol L PBS95%乙醇二甲苯仪器、耗材玻片实验步骤1. 培养细胞小玻片标本的制备 根据所检测病毒种类，选择敏感细胞进行培养，如乙型肝炎病毒用乳地鼠肾细胞 (BHK21 细胞）培养，森林脑炎病毒用绿猴肾细胞 (Vero 细胞）培养，登革热病毒用白纹伊蚊
反转录病毒产毒细胞系建立实验
实验材料 包装细胞系试剂、试剂盒 HEPESCaCl2甘油DMSO仪器、耗材 培养皿培养板离心机实验步骤 1. 在转染前1天，在10 cm 培养皿中接种包装细胞，接种密度大约相当于10%~20%片的细胞数。2. 将10 μg 含有药物抗性基因的反转录病毒质粒DNA加入0.5 ml HeBS。再加
反转录病毒产毒细胞系建立实验
建立一个能产生高水平的反转录病毒构建体的细胞系是一个长期的过程。首先，必须将反转录病毒构建体稳定地导入一种适当的包装细胞系中。当产生了稳定的细胞系后，必须对之进行鉴定，从中选出能产生具有正确结构的高滴度的病毒的细胞系。实验材料包装细胞系试剂、试剂盒HEPESCaCl2甘油DMSO仪器、耗材培养皿培养
反转录病毒产毒细胞系建立实验
反转录病毒载体导入包装细胞系 测定病毒滴度 培养细胞的Xgal染色 实验材料 包装细胞系
大规模制备的定义
中文名称大规模制备英文名称megapreparation;megaprep定 义能供较大量使用或生产性产品制取的方式。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
从大规模裂解物中制备λ噬菌体颗粒实验
从大规模培养物中制备的 λ 噬菌体，可在高盐存在下用聚乙二酵 ( PEG ) 沉淀的办法从裂解物中回收得到。残余的细胞碎片和 PEG 可用氯仿抽提。在进一步纯化之前，建议测定噬菌体制备物的得率。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理从大规模培养物中制备的 λ 噬菌体，可在高盐存
从大规模裂解物中制备λ噬菌体颗粒实验
实验方法原理 从大规模培养物中制备的 λ 噬菌体，可在高盐存在下用聚乙二酵 ( PEG ) 沉淀的办法从裂解物中回收得到。残余的细胞碎片和 PEG 可用氯仿抽提。在进一步纯化之前，建议测定噬菌体制备物的得率。实验材料 大肠杆菌培养物试剂、试剂盒 氯仿NaCl聚乙二醇SM胰 DNaseⅠ仪器、耗材 S
从大规模裂解物中制备λ噬菌体颗粒实验
实验方法原理 从大规模培养物中制备的 λ 噬菌体，可在高盐存在下用聚乙二酵 ( PEG ) 沉淀的办法从裂解物中回收得到。残余的细胞碎片和 PEG 可用氯仿抽提。在进一步纯化之前，建议测定噬菌体制备物的得率。
反转录病毒产毒细胞系建立实验——测定病毒滴度
实验材料病毒原液试剂、试剂盒G418仪器、耗材离心机培养箱实验步骤1. 感染的前1天按1：10至1：20将靶细胞NIH 3T3分传于6 cm 培养皿中。 2. 进行感染的当天，移去靶细胞的培养液，加入含有病毒原液的培养液。用1~2 ml 含 有0.01 μl~0.1 ml 病毒原液的培养液感染6