非肌肉肌动蛋白的纯化实验
实验材料非肌肉肌动蛋白试剂、试剂盒DNA 酶Ⅰ缓冲液仪器、耗材DEAE 柱实验步骤1. 准备贮存液和材料。2x DNA 酶Ⅰ缓冲液:20 mmol/L Tris-HCl,pH 8.01 mmol/L DTT0.4 mmol/L CaCI20.4 mmol/L ATP抑蛋白酶肽抑蛋白酶亮抑蛋白酶肽抑胃酶肽 APMSFTPCK50% 甲醛在 DNA 酶柱缓冲液中0.4 mol/L NH4CI 在 DNA 酶Ⅰ缓冲液中0.3 mol/L KCl 在 DNA 酶Ⅰ缓冲液中DNA酶Ⅰ柱缓冲液2. 准备一个 5~10 ml 的 DNA 酶Ⅰ的亲和柱。3. 准备一个 0.2 ~1 ml 的 DEAE 柱:用 DNA 酶Ⅰ缓冲液平衡的 DEAE-纤维素。4. 通过离心收集细胞并用等渗盐溶液(例如 PBS ) 洗去培养液。5. 在加蛋白酶抑制剂的 DNA 酶柱缓冲液中重悬细胞沉淀物。6. 用对于感兴趣细胞的标准方法进行细胞匀浆。7. 用相差显微镜......阅读全文
非肌肉肌动蛋白的纯化实验
非肌肉肌动蛋白的纯化实验材料非肌肉肌动蛋白 试剂、试剂盒DNA 酶Ⅰ缓冲液
非肌肉肌动蛋白的纯化实验
实验材料 非肌肉肌动蛋白 试剂、试剂盒 DNA 酶Ⅰ缓冲液 仪器、耗材
非肌肉肌动蛋白的纯化实验
实验材料非肌肉肌动蛋白试剂、试剂盒DNA 酶Ⅰ缓冲液仪器、耗材DEAE 柱实验步骤1. 准备贮存液和材料。2x DNA 酶Ⅰ缓冲液:20 mmol/L Tris-HCl,pH 8.01 mmol/L DTT0.4 mmol/L CaCI20.4 mmol/L ATP抑蛋白酶肽抑蛋白酶亮抑蛋白酶肽抑胃
肌肉肌球蛋白和肌动蛋白纯化实验_DEAE纯化肌肉肌球蛋白
实验材料肌肉肌球蛋白试剂、试剂盒焦磷酸钠柱平衡缓冲液柱缓冲液高盐缓冲液肌球蛋白-DEAE 透析缓冲液仪器、耗材SDS-PAGE实验步骤一、准备 DEAE 柱和材料1. 准备贮存液和材料200 mmol/L 焦磷酸钠(NaPPi ),pH 7.0用 HCl 和 H3PO4 调 NaPPi 溶液的 pH
纯化非肌肉肌球蛋白实验——非肌肉肌球蛋白的层析纯化
实验材料非肌肉肌球蛋白试剂、试剂盒匀浆缓冲液肌动蛋白聚合缓冲液凝胶过滤 羟基磷灰石缓冲液GF HT 缓冲液仪器、耗材大容量转头实验步骤高速离心和 DEAE 层析1. 用不含除了 PMSF 以外的蛋白水解抑制剂的匀浆缓冲液平衡 DEAE 纤维素,取 50 ml 装到 2.5cm x 35cm 有合适管
肌肉肌球蛋白和肌动蛋白的纯化实验
实验材料 冷冻肌肉试剂、试剂盒 肌球蛋白抽提溶液仪器、耗材 玻璃器皿实验步骤 1. 准备下面的贮存液(都冷却到 4℃)。肌球蛋白抽提溶液:0.5 mol/L KCl,0.1 mol/L K2HPO4几升冷的用玻璃器皿蒸馏过的水(dH2O)4 mol/L KCl0.5 mol/L KCI0.5 mol
肌肉肌球蛋白和肌动蛋白的纯化实验
肌球蛋白的纯化 DEAE纯化肌肉肌球蛋白 实验材料 冷冻肌肉 试
肌肉肌球蛋白和肌动蛋白的纯化实验
肌球蛋白的纯化DEAE纯化肌肉肌球蛋白实验材料冷冻肌肉 试剂、试剂盒肌球蛋白抽提溶液
制备肌动蛋白实验——从肌肉制备丙酮粉用于纯化肌动蛋白
实验材料肌球蛋白试剂、试剂盒肌球蛋白抽提溶液仪器、耗材离心机实验步骤1. 抽提肌球蛋白时得到的沉淀物用 3 倍于沉淀物体积的肌球蛋白抽提溶液抽提 10 分钟。肌球蛋白抽提溶液:0.5 mol/L KCl0.1 mol/L K2HPO42. 抽提物离心(GSA 转头,13000 r/min,17310
纯化非肌肉肌球蛋白实验
细胞匀浆 非肌肉肌球蛋白的层析纯化 实验材料 细胞 试剂、试剂盒
纯化非肌肉肌球蛋白实验
细胞匀浆非肌肉肌球蛋白的层析纯化实验材料细胞 试剂、试剂盒缓冲盐溶液
肌肉肌球蛋白和肌动蛋白的纯化实验——肌球蛋白的纯化
实验材料冷冻肌肉试剂、试剂盒肌球蛋白抽提溶液仪器、耗材玻璃器皿实验步骤1. 准备下面的贮存液(都冷却到 4℃)。肌球蛋白抽提溶液:0.5 mol/L KCl,0.1 mol/L K2HPO4几升冷的用玻璃器皿蒸馏过的水(dH2O)4 mol/L KCl0.5 mol/L KCI0.5 mol/L C
纯化非肌肉肌球蛋白实验——细胞匀浆
实验材料细胞试剂、试剂盒缓冲盐溶液二异丙基氟瞬酸匀浆缓冲液仪器、耗材相差显微镜实验步骤1. 准备下面的贮液和材料。等渗的缓冲盐溶液(例如 PBS,150 mmol/L NaCl;10 mmol/L NaPO4,pH 7.2)二异丙基氟瞬酸(DIFP)1 mol/L 咪唑-HCl,pH 7.00.5
制备肌动蛋白实验——将肌动蛋白纯化成纯品
实验材料肌动蛋白试剂、试剂盒缓冲液仪器、耗材SDS-PAGE实验步骤1. 准备 2~8 mg/ml 溶在缓冲液 A 中的常规肌动蛋白。2. 10 ml 常规的肌动蛋白上样到凝胶过滤柱(2.5cm x 50cm Sephadex G-150 柱,用缓冲液 A 平衡)。3. 肌动蛋白样品进入凝胶后,上面
制备肌动蛋白实验
从肌肉制备丙酮粉用于纯化肌动蛋白 由骨骼肌丙酮粉制备肌动蛋白 将肌动蛋白纯化成纯品 实验材料 肌球蛋白
制备肌动蛋白实验
实验材料 肌球蛋白试剂、试剂盒 肌球蛋白抽提溶液仪器、耗材 离心机实验步骤 1. 抽提肌球蛋白时得到的沉淀物用 3 倍于沉淀物体积的肌球蛋白抽提溶液抽提 10 分钟。肌球蛋白抽提溶液:0.5 mol/L KCl0.1 mol/L K2HPO42. 抽提物离心(GSA 转头,13000 r/min,1
制备肌动蛋白实验——由骨骼肌丙酮粉制备肌动蛋白
实验材料骨骼肌丙酮粉试剂、试剂盒肌动蛋白解聚缓冲液仪器、耗材超速离心机实验步骤1. 准备贮存液和材料0.1 mol/L K+ATP,pH 7.00.1 mol/L DTT(冻存在 -20℃,避免反复冻融)0.1 mol/L CaCl20.1 mol/L Tris-HCl,pH 8.0肌动蛋白解聚缓冲
肌肉组织的观察实验
实验材料平滑肌、骨骼肌、心肌仪器、耗材载玻片盖玻片脱脂棉刺血针油镜用油显微镜。实验步骤平滑肌(一)平滑肌分离装片(H-E染色)的观察1.低倍镜观察 先用低倍镜寻找,找到平滑肌后换用高倍镜2.高倍镜观察 可见平滑肌纤维的整体形态。平滑肌纤维为长梭形,胞核长椭圆形,位于细胞的中部。在常规染色标本上肌原纤
肌肉组织的观察实验
实验材料 平滑肌、骨骼肌、心肌仪器、耗材 载玻片盖玻片脱脂棉刺血针油镜用油显微镜。实验步骤 平滑肌(一)平滑肌分离装片(H-E染色)的观察1.低倍镜观察 先用低倍镜寻找,找到平滑肌后换用高倍镜2.高倍镜观察 可见平滑肌纤维的整体形态。平滑肌纤维为长梭形,胞核长椭圆形,位于细胞的中部。在常规染色标本上
抗体的纯化实验
实验方法原理利用细菌胞壁蛋白的特性可以提供了一个快速、简捷、特异、高效的抗体纯化方法。这里细菌胞壁蛋白主要指蛋白 A 和蛋白 G,它们分别从金黄色化脓性葡萄球菌和 G 组链球菌分离纯化。它们能特异结合到免疫球蛋白的 Fe 部分。由于它们对不同的免疫球蛋白有不同的亲和力,所以应根据免疫球蛋白的种类和类
抗体的纯化实验
实验方法原理 利用细菌胞壁蛋白的特性可以提供了一个快速、简捷、特异、高效的抗体纯化方法。这里细菌胞壁蛋白主要指蛋白 A 和蛋白 G,它们分别从金黄色化脓性葡萄球菌和 G 组链球菌分离纯化。它们能特异结合到免疫球蛋白的 Fe 部分。由于它们对不同的免疫球蛋白有不同的亲和力,所以应根据免疫球蛋白
抗体的纯化实验
抗体的纯化 实验方法原理 利用细菌胞壁蛋白的特性可以提供了一个快速、简捷、特异、高效的抗体纯化方法。这里细菌胞壁蛋白主要指蛋白 A 和蛋白 G,它们分别从
基因传递到肌肉实验
实验材料 新生的小鼠试剂、试剂盒 乙醇PBS胶原蛋白酶 分散酶 氯化钙溶液F-10肌肉原代细胞培养基分化培养基仪器、耗材 用于断头术的器具或者是用于二氧化碳吸人的装置锋利的弯手术剪(灭菌) 组织培养板灭菌的剃刀刀片尼龙网桌面离心机胶原包被的组织培养板带相位光轴的倒置显微镜实验步骤 1.用断头术或者二
肌肉组织染色实验
实验方法原理 肌肉组织由肌细胞和肌纤维组成,带有横纹结构,通常选用 Mallory 磷钨酸-苏木精染色法(PTAH)显示横纹肌的变化情况。染色剂与所选择的组织成分能够牢固地结合,呈蓝色或棕红色。实验材料 石蜡组织切片试剂、试剂盒 苏木精磷钨酸蒸馏水 高锰酸钾水溶液硫酸水溶液二甲苯乙醇中性树胶实验步骤
纯化DNA实验
从哺乳动物细胞或组织分离DNA 基因组DNA的快速纯化 纯化质粒(碱裂解法) 实验材料 细胞
免疫纯化实验
实验方法原理 制备免疫亲和柱要求抗体首先共价结合到介质上。另一方法是将抗体结合到蛋白 A 或 G 小珠上,再用交联剂固相化。后一方法由于蛋白 A 或 G 结合在杭体的 Fe 区, 所以结合抗原的部位获得充分暴露,从易于接近。免疫亲和柱
凝胶纯化实验
试剂、试剂盒 蒸馏水乙醇甲酰胺胶的缓冲液亚甲基蓝十二烷基硫酸钠储存液TAE 缓冲液Tris 乙酸盐乙酸纳EDTA蓝色葡聚糖TEN 缓冲液40mer聚丙烯酰胺胶仪器、耗材 解剖刀UV 灯过滤 UV 的安全破璃实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂蒸馏水乙醇,95%甲酰胺 (使用安珀莱特单床离子交换
免疫纯化实验
在蛋白质纯化方法中抗体亲和纯化是非常有效的方法之一。仅此一步常可获得 1000~10 000 倍的纯化。如果抗体与目的蛋白的结合的特异性得到证明,并且洗脱的目的蛋白没有受到不可逆的损伤,那么可以认为免疫纯化是极好的蛋白质纯化方法,特别是用在纯化过程的最后步骤。实验方法原理制备免疫亲和柱要求抗体首先共
凝胶纯化实验
试剂、试剂盒蒸馏水乙醇甲酰胺胶的缓冲液亚甲基蓝十二烷基硫酸钠储存液TAE 缓冲液Tris 乙酸盐乙酸纳EDTA蓝色葡聚糖TEN 缓冲液40mer聚丙烯酰胺胶仪器、耗材解剖刀UV 灯过滤 UV 的安全破璃实验步骤一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂蒸馏水乙醇,95%甲酰胺 (使用安珀莱特单床离子交换树脂
DNA纯化实验
实验方法原理 硅胶膜可在高盐条件下结合DNA,又可在低盐条件下与DNA分离。用于清洁目的的含DNA溶液中的引物、单核苷酸、酶、矿物油、盐离子等杂质因为没有与DNA相似的特性,所以被分离开来。实验材料 PCR产物试剂、试剂盒 PCR清洁试剂盒仪器、耗材 96孔DNA制备板96孔深孔板96孔V型底板实验