iTRAQ蛋白质组揭示油菜卷叶机理
文献：Histological, Physiological, and Comparative Proteomic Analyses Provide Insights into Leaf Rolling in Brassica napus.Journal of Proteome Research IF4.268 iTRAQ研究背景叶片是大多数植物光合作用的主要器官，叶片发育影响作物产量和植物结构。适度的卷叶被认为是作物理想型育种的一个重要组成部分，它能够改变植物的结构，提高光合效率，延缓叶片衰老，减轻干旱、高温和高光等胁迫带来的损害。近年来，在拟南芥和水稻等物种中，已经分离出了卷曲叶片突变体，并对它们的分子机制进行了深入的研究。油菜作为世界上最重要的油料作物之一，虽然也发现了一些卷曲叶片的突变体，但是对于其作用机制仍有待进一步的研究。本文作者主要利用iTRAQ定量蛋白质组学技术分析油菜卷叶突变株Bndcl1与野生株（W......阅读全文
QRTPCR
Comparison of normalisation methodsThere is an ongoing debate what is the best way to normalise qPCR data. Reference genes are the most common method,
QRTPCR
Comparison of normalisation methodsThere is an ongoing debate what is the best way to normalise qPCR data. Reference genes are the most common method,
qRTPCR
实验概要实时定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。目前，实时定量PCR所使用的荧光化学组分一般可分为两种：荧光探针和荧光染料。1）TaqMan荧光探针：PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的
qRTPCR
实验概要实时定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。目前，实时定量PCR所使用的荧光化学组分一般可分为两种：荧光探针和荧光染料。1）TaqMan荧光探针：PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的
蛋白质定量技术――iTRAQ
摘要：同位素标记相对和绝对定量（iTRAQ）技术是近年来最新开发的一种新的蛋白质组学定量研究技术，具有较好的定量效果、较高的重复性，并可对多达四种不同样本同时进行定量分析。研究人员采用iTRAQ蛋白质定量技术加速蛋白质的定量研究，当然这门新兴的工具仍然需要进一步的完善。 仅仅知道蛋白质的身
iTRAQ技术研究植物胁迫
Comparativeproteomic analysis of the shoot apical meristem in maize between aZmCCT-associated near-isogenic line and its recurrent parent.文献来源：htt
qRTPCR的模版需求
通常而言，如果你想做一个突变体鉴定实验，那么模版质量要求可适当放宽，只要cRNA反转录成功即可。但如果你要做一个厉害的标记基因鉴定，并且想要达到传说中“三线合一”的境界，那么模版质量就另当别论了。首先，RNA要经过严格的定量（因为反转成cDNA后，反转时加入的dNTP会严重干扰定量结果，因此对cDN
iTRAQ技术常见问题与答疑
1、什么是iTRAQ？ iTRAQ技术，即同位素相对标记与绝对定量技术。该技术可对复杂样本、细胞器、细胞裂解液等样本进行相对和绝对定量研究，具有较好的定量效果、较高的重复性。由于其能够同时对多达8种样品进行标记分析,故在生命科学的各个领域得到了广泛的应用。2、iTRAQ的原理是什么？
APT文献－|－蛋白质组学揭示植物干旱胁迫的分子机制
Significant and unique changes in phosphorylation levels of four leaf phosphoproteins in two apple rootstock genotypes under drought stress. 干旱胁
qRTPCR中体系的配置
qRT-PCR要求对每个样品做三个平行体系。一般来说，每个最终的反应体系为10μl（然而试剂盒上推荐的体系为25 μl，但这样既浪费酶，用中号枪头加样还降低了重复性）。最好用10 μl小号进口枪头加入。配体系时，一般先将水、MIX及引物混成3倍体积的总体系（此时应给每管留1.5ul的损耗，另外有些仪
蛋白质组学揭示油菜卷叶机理（二）
图4. 差异表达蛋白的COG注释分析 图5. 差异表达蛋白的KEGG富集分析5. 为了进一步对这些差异蛋白的功能进行分类分析，作者进行了功能富集分析。通过对差异蛋白的富集分析结果发现，这些发生上调的蛋白能够改善Bndcl1株的光合性
qRTPCR中SYBRGreen酶的选择
高质量的酶是保证高质量结果的前提。现在市售的酶多为2 X MIX的形式。在市售酶的选用方面，我们首先应该选择稳定、扩增效率高的酶，其次还应注意解冻后的MIX粘性不宜过大（粘性过大的MIX会导致加样时枪头出现挂液），最后应注意同一板qRT-PCR体系不宜用两管MIX，即加完一管发现不够用，继续开一管新
科研入门基础实验之qRTPCR
这个假期太长，长的我差点忘了自己之前是做啥课题的，直到和某个zz一起玩公众号，商量着Ta负责生信领域，我负责实验部分，各取所长，想想也未尝不可，那就姑且试试吧。 接下来我开始用力回忆当初最先学的实验是啥？对，是逆转录定量 PCR（qRT-PCR）！ 首先来了解qRT-PCR的流程：提取组织/
qRTPCR技术的原理及应用？
实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR)/qRT-PCR，是指在PCR反应体系中加入荧光标记物，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过扩增曲线对未知模板进行定量分析的方法。一般用于mRNA转录水平的定量研究、不同样本或基因组中DNA拷贝数的测定、基因芯片结
APT文献－|－蛋白质组学揭示植物干旱胁迫的分子机制
Significant and unique changes in phosphorylation levels of four leaf phosphoproteins in two apple rootstock genotypes under drought stress. 干旱
蛋白质组学揭示植物干旱胁迫的分子机制
Significant and unique changes in phosphorylation levels of four leaf phosphoproteins in two apple rootstock genotypes under drought stress.干旱胁迫对
qrtpcr加cDNA的量，怎么加
因为你所要检测的目的片段丰度不同，所以需要先做个预实验。怎么做呢？你先把cdna进行梯度稀释，然后进行pcr，如果你的primer所扩增的ct值在15-25之间，那么就是很不错的稀释梯度啦～以后实验久按照这个浓度加就好了
qPCR和qRTPCR各有什么优缺点
QRT PCR一般指以RNA为模板，先逆转成cDNA，再进行qPCR。更容易突变，因此种类更多，更难研制有效疫苗，难以预防。RNA病毒的抵抗力普遍比DNA病毒弱，治愈也更容易。但也有例外，例如双链RNA病毒的抵抗力就很强，逆转录病毒的治愈就极其困难。植物病毒，除少数例外（如花椰菜花叶病毒Caulif
qPCR和qRTPCR各有什么优缺点
QRT PCR一般指以RNA为模板，先逆转成cDNA，再进行qPCR而qPCR一般是泛指，既可以当它是qRTPCR，也可以指他是专门定量检测DNA的比如检测细菌的16S，那不需要做RT，直接用qPCR检测定量即可。
qrtpcr加cDNA的量，怎么加
因为你所要检测的目的片段丰度不同，所以需要先做个预实验。怎么做呢？你先把cdna进行梯度稀释，然后进行pcr，如果你的primer所扩增的ct值在15-25之间，那么就是很不错的稀释梯度啦～以后实验久按照这个浓度加就好了
qPCR和qRTPCR各有什么优缺点
QRT PCR一般指以RNA为模板，先逆转成cDNA，再进行qPCR。更容易突变，因此种类更多，更难研制有效疫苗，难以预防。RNA病毒的抵抗力普遍比DNA病毒弱，治愈也更容易。但也有例外，例如双链RNA病毒的抵抗力就很强，逆转录病毒的治愈就极其困难。植物病毒，除少数例外（如花椰菜花叶病毒Caulif
qRTPCR检测对样品有何要求？
取材后新鲜组织须于-80℃保存，干冰运输。动物组织＞100mg，细胞数＞106，植物组织＞0.5g、幼嫩组织为宜，预计可以检测4个指标，避免反复冻融。当检测基因数较多时样品量须随之增加。
qRTPCR的引物设计注意事项
qRT-PCR有自己的引物标准，简单而言，引物设计要用专门的软件，qpcr引物设计原则包括内参基因与目的基因在内的所有引物Tm值不应相差两度。扩增片段的长度以200-300 bp为宜。除此之外，还需要注意以下法则： 1）用于突变体的基因表达量鉴定时，引物最好设在两个外显子之间，横跨中间的内含子
【Sci－Rep－IF5.228】iTRAQ技术研究植物胁迫
associated near-isogenic line and its recurrent parent. 文献来源：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27468931 研究背景：ZmCCT，是影响植物光周期反应非常重要的一个基因。对于玉米而
定量蛋白质组表达谱分析技术iTRAQ/TMT
iTRAQ(Isobaric Tag for Relative Absolute Quantitation)和TMT(Tandem Mass Tags)技术是分别由美国AB Sciex公司和Thermo公司研发的多肽体外标记定量技术。这两种技术采用2-10种稳定同位素标签，通过特异性 标记多肽的
定量蛋白质组表达谱分析技术——iTRAQ/TMT
iTRAQ(Isobaric Tag for Relative Absolute Quantitation)和TMT(Tandem Mass Tags)技术是分别由美国AB Sciex公司和Thermo公司研发的多肽体外标记定量技术。这两种技术采用2-10种稳定同位素标签，通过特异性 标
如何看QRTPCR－结果中的Cq值
你先把几次试验的对照组的平均值设为1, 再把每个单独试验对照组的数值算出和这个对照组平均值的差异，就可以计算标准差了。这么简单的统计分析，用不着SPSS吧， excel就可以解决了。追问 : 谢谢您，可是我还是有点不明白：如果我重复三次，每次3个复孔（即一共9个孔），您指的“把几次试验的对照组的平均
如何看QRTPCR－结果中的Cq值
你先把几次试验的对照组的平均值设为1, 再把每个单独试验对照组的数值算出和这个对照组平均值的差异，就可以计算标准差了。这么简单的统计分析，用不着SPSS吧， excel就可以解决了。追问 : 谢谢您，可是我还是有点不明白：如果我重复三次，每次3个复孔（即一共9个孔），您指的“把几次试验的对照组的平均
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你先把几次试验的对照组的平均值设为1, 再把每个单独试验对照组的数值算出和这个对照组平均值的差异，就可以计算标准差了。这么简单的统计分析，用不着SPSS吧， excel就可以解决了。追问 : 谢谢您，可是我还是有点不明白：如果我重复三次，每次3个复孔（即一共9个孔），您指的“把几次试验的对照组的平均
如何看QRTPCR－结果中的Cq值
这样算：你先把几次试验的对照组的平均值设为1, 再把每个单独试验对照组的数值算出和这个对照组平均值的差异，就可以计算标准差了。这么简单的统计分析，用不着SPSS吧， excel就可以解决了。追问 : 谢谢您，可是我还是有点不明白：如果我重复三次，每次3个复孔（即一共9个孔），您指的“把几次试验的对照