使用合成核苷酸作探针实验——在氯化钠／柠檬酸钠中杂交
基因探针（probe）又称“寡核苷酸探针”，简称“探针”，就是一段与目的基因或DNA互补的特异核苷酸序列，它可以包括整个基因，也可以仅仅是/基因的一部分；可以是DNA本身，也可以是由之转录而来的RNA。实验材料核苷酸试剂、试剂盒SSC焦磷酸钠SDS仪器、耗材培养箱水浴锅实验步骤1. 制备双份的转印细菌菌落或噬斑的硝酸纤维素滤膜（处理和干烤过）。2. 在室温下用3× SDS / 0.1%SDS溶液500 ml 洗膜3~5次。3. 然后在65℃洗膜至少1.5 h 以上直至过夜。 4. 在预杂交液中37℃预杂交1 h。 5. 在装有20 ml 以上的SSC杂交液的可封口的杂交袋中可移入多达20张的滤膜。6. 在毎 个杂交袋中每毫升杂交液加入0.125 ng 至1.0 ng 的每种32P标记的寡核苷酸。7. 在以下给定的温度条件下寡核......阅读全文
探针合成实验
基本方案 实验材料 基因 试剂、试剂盒
探针合成实验
实验材料 基因试剂、试剂盒 转录缓冲液DTTRNA酶抑制剂CTPATPGTPS-UTP乙酸铵乙酸铵乙醇仪器、耗材 水浴锅离心机培养箱烘箱实验步骤 1. 在一个含SP6、T3或T7启动子的载体中，插入目的基因。在编码序列下游酶切使质粒呈线性。DNA以酚/氯仿抽提，乙醇沉淀，70%乙醇洗后晾干。以无菌
探针合成实验
实验材料基因试剂、试剂盒转录缓冲液DTTRNA酶抑制剂CTPATPGTPS-UTP乙酸铵乙酸铵乙醇仪器、耗材水浴锅离心机培养箱烘箱实验步骤1. 在一个含SP6、T3或T7启动子的载体中，插入目的基因。在编码序列下游酶切使质粒呈线性。DNA以酚/氯仿抽提，乙醇沉淀，70%乙醇洗后晾干。以无菌水重溶沉
杂交探针的检测实验
实验步骤 1. 暗室中，以42~45℃水浴，温育盛有4盎司（113.3 g）Kodak NTB-2放射自显影胶乳瓶30 min。同时，在500 ml 三角瓶中预热等体积的水至相同温度。 2. 胶乳熔化后，缓慢沿三角瓶壁（以一角度）倒入瓶中
杂交探针的检测实验
1. 将载玻片以胶带固定于硬纸板或废胶片上。2. 将Du Pont Cronex 成像胶片（MRF 34 Clear） 轻压在玻片上4℃曝光。3. 当用这种胶片时，应注意以胶片的胶乳面正对样品。
核酸探针标记的实验过程
实验原理分子生物研究中，zui常用的探针即为双链DNA探针，它广泛应用于转基因植物拷贝数的鉴定、临床诊断等方面。双链DNA探针的合成方法主要有下列两种:切口平移法和随机引物合成法。切口平移法(nick translation) 当双链DNA分子的一条链上产生切口时,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可
杂交探针的检测实验1
放射自显影胶片用于检测与细胞学样品进行杂交的32P或35S-标记探针，并可应用于在大的器官或组织进行的实验，欲获得单细胞水平结果，需要用乳胶放射自显影。实验步骤1. 将载玻片以胶带固定于硬纸板或废胶片上。2. 将Du Pont Cronex 成像胶片（MRF 34 Clear） 轻压在玻片上4℃
杂交探针的检测实验2
实验材料胶乳试剂、试剂盒显影剂仪器、耗材浸泡盒水浴锅玻片架实验步骤1. 在42℃~45℃水浴溶化小份稀释的胶乳10 min，将胶乳倒入或吸入洁净的玻片包装盒中（浸泡盒）。 2. 将玻片缓慢并轻柔地浸入浸泡盒中，缓慢取出并垂直放置在试管架上或将玻片置于干燥器中2 h，使其干燥。3. 将充分干燥的
DNA片段探针的应用实验
甲酰胺法 水溶液中杂交 实验材料 DNA 试剂、试剂盒
核酸探针标记的实验过程
实验原理分子生物研究中，zui常用的探针即为双链DNA探针，它广泛应用于转基因植物拷贝数的鉴定、临床诊断等方面。双链DNA探针的合成方法主要有下列两种:切口平移法和随机引物合成法。切口平移法(nick translation) 当双链DNA分子的一条链上产生切口时,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可将
DNA片段探针的应用实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 杂交液洗膜液仪器、耗材 注射器超声仪水浴锅实验步骤 1. 用5~20 ml 杂交液Ⅰ依次浸泡10~20张硝酸纤维素滤膜。滤膜装入杂交袋中，加入足够的杂交液，密封后42℃预杂交1 h。 2. 往带螺盖的试管中，加入放射性探针和2 mg 超声波处理的鲱鱼精DNA，煮沸1
核酸探针标记的实验过程
实验原理分子生物研究中，最常用的探针即为双链DNA探针，它广泛应用于转基因植物拷贝数的鉴定、临床诊断等方面。双链DNA探针的合成方法主要有下列两种:切口平移法和随机引物合成法。切口平移法(nick translation) 当双链DNA分子的一条链上产生切口时,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可将
杂交探针的检测实验3
实验步骤1. 暗室中，以42~45℃水浴，温育盛有4盎司（113.3 g）Kodak NTB-2放射自显影胶乳瓶30 min。同时，在500 ml 三角瓶中预热等体积的水至相同温度。2. 胶乳熔化后，缓慢沿三角瓶壁（以一角度）倒入瓶中并混匀（轻旋1~2次，防止气泡产生）。 3. 分装胶乳于尼龙
DNA探针的标记实验
探针标记法 实验方法原理 分子杂交是核酸链以碱基配对规则的一种结合方式，是核酸的重要理化特性。利用分子杂交这一特性来对特定核酸序列进行检测，必须将杂交链中的一
DNA探针的标记实验
核酸探针分子杂交是指具有一定同源性的两条核酸单链在一定条件下可按碱基互补原则形成双链，此杂交过程是高度特异的。核酸探针根据核酸的性质，可分为DNA和RNA探针；根据标记物不同，可分为放射性标记探针和非放射性标记探针两大类；根据是否存在互补链，可分为单链和双链探针；根据放射性标记物掺入情况，可分为均匀
DNA探针的标记实验
实验方法原理 分子杂交是核酸链以碱基配对规则的一种结合方式，是核酸的重要理化特性。利用分子杂交这一特性来对特定核酸序列进行检测，必须将杂交链中的一条用某种可以检测的进行标记，这条链就称为核酸探针。因此，核酸探针的制备是分子杂交技术的关键。放射性同位素标记是最早采用的也是目前最常用的核酸探针标记方法。
地高辛标记cRNA探针实验方法
1．组织前处理在组织制片中以冷冻切片（厚10～30μm）最佳。切片贴在预先清洁，高温处理并涂以粘附剂载玻片上，先在37℃预干燥4h，然后置于37℃烤箱中过夜。经过上述处理的切片如在-20℃可保存2～3周，在-70℃可保存数月之久，有报告可保存数年之久的。但仍以新鲜制片为好。如为石蜡包埋切片，应脱
生物素酰化探针的制备实验
切口平移法 随即寡核苷酸引物合成法 实验材料 DNA 试剂、试剂
DNA－酶－I－足迹探针的制备实验
试剂、试剂盒TE牛肠碱性磷酸酶缓冲液T4 多核苷酸激酶缓冲液TBE 加样缓冲液TBE质粒 DNA合适的限制酶粉 氯仿氯仿 异戊醇（3-甲基-1-丁醇）乙醇牛肠碱性磷酸酶[γ-32P]ATPT4 多核苷酸激酶乙酸铵乙酸钠丙烯酰胺双丙烯酰胺过硫酸铵TEMED仪器、耗材SpeedVac 旋转浓缩器实验步骤
DNA－酶－I－足迹探针的制备实验
DNA 酶 I 足迹探针的制备实验 试剂、试剂盒 TE 牛肠碱性磷酸酶缓冲液 T4 多核苷
高地辛标记的DNA探针制备实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 dTTPdUTPEDTASDS仪器、耗材 水浴锅培养箱实验步骤 1. 建立一个标准100 μl 反应体系，用10 μl，10×地高辛·11-dUTP/dTTP贮液，DNA酶Ⅰ酶量不变，15℃温育2 h。2. 取小份在微型胶中进行电泳以检测探针大小。3. 继续反应直
生物素酰化探针的检测实验
比色法 化学发光法 实验材料 DNA 试剂、试剂盒
生物素酰化探针的制备实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 DNA聚合酶dNTP2-疏基乙醇生物素甘油NaClEDTASDS无水乙醇仪器、耗材 注射器电泳仪离心机培养箱实验步骤 1. 混合以下物质于100 μl 反应体积：（1）10 μl 10×大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ缓冲液（2）10 μl 0.5 mmol/l 3dNTP
DNA－酶－I－足迹探针的制备实验
试剂、试剂盒 TE牛肠碱性磷酸酶缓冲液 T4 多核苷酸激酶缓冲液TBE 加样缓冲液TBE质粒 DNA合适的限制酶粉 氯仿氯仿 异戊醇（3-甲基-1-丁醇）乙醇牛肠碱性磷酸酶[γ-32P]ATPT4 多核苷酸激酶乙酸铵 乙酸钠丙烯酰胺双丙烯酰胺过硫酸铵TEMED仪器、耗材 SpeedVac 旋转浓缩器
生物素酰化探针的检测实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 磷酸酶缓冲液封阻液牛血清蛋白TENBT仪器、耗材 离心机分光光度计摇床实验步骤 1. 用DNA稀释缓冲液，稀释生物素酰化标准DNA，浓度为0、1、2、5、10和20 pg/μl。以同样稀释液处理待测DNA。2. 对干硝酸纤维素滤膜：每个稀释度取1 μl 点膜，在80
高地辛标记的DNA探针制备实验
基本方法 实验材料 DNA 试剂、试剂盒
非同位素探针进行原位杂交实验地高辛标记探针信号放大
试剂、试剂盒10μg ml 羊抗地筒辛抗体 Fab 片段 溶于 4×SSC 1% m VBSA (组分V)地高辛信号放大溶液：3. 5〜7. 0 ug ml荧光素标记的兔抗羊IgG (Sigma) 溶于 4×SSC 1% m V BSA (组分 V)仪器、耗材Parafilm 膜玻片实验步骤1) 用
地高辛标记探针的化学发光检测实验
地高辛系统是过提供的另一种非同位素标记方法，其检测方法是通过偶联上一种或数种荧光染料或酶的抗地高辛抗体，或用间接免疫荧光来测定。实验材料DNA试剂、试剂盒抗体实验步骤1. 用地髙辛标记探针与带DNA或RNA印迹的正电荷尼龙膜杂交。 2. 根据厂商的推荐条件，封闭和结合抗体。3. 对X光片曝光约
地高辛标记探针的化学发光检测实验
化学发光法 实验材料 DNA 试剂、试剂盒
地高辛标记探针的化学发光检测实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 抗体实验步骤 1. 用地髙辛标记探针与带DNA或RNA印迹的正电荷尼龙膜杂交。 2. 根据厂商的推荐条件，封闭和结合抗体。3. 对X光片曝光约20 min。